【2017年整理】血凝应用培训资料.docVIP

血凝应用主要原理 吴子权 止血分析概述 正常情况下血液在动脉、静脉和毛细血 管中持续流动. 当上述情况受到损伤、凝块等影响后, 诸多因素会共同作用使之恢复. 凝血机制的瀑布学说: 内源性凝血途径激活 外源性凝血途径激活 XIIa IX XII VII XI XIa VIIa IXa X VIII VIIIa 纤维蛋白原 Xa Va 凝血酶原 (II因子) 凝血酶 (活化的 II因子) 纤维蛋白 凝块 PT试验（凝血酶原时间） 促凝血酶原激酶 VII VIIa IXa Va X Xa 纤维蛋白原 凝血酶原 (II因子) 凝血酶 (活化的 II因子) 测定时间(秒) 纤维蛋 白凝块 PT试验 ISI 样本PT秒数 INR = 当地正常人均值 INR:国际标准化比率(International Normalized Ratio) ISI:国际敏感指数(International Sensitivity Index) 每一批PT试剂的ISI都不同,通,过上述计算使INR值得 到全球范围内统一. . PT当地正常人均值:每个实验室自己测定得到的当地正 常人群PT均值. PT试验 测定凝血酶原时间PT HYPERLINK /chanpin/ 临床应用: ?术前监测 ?口服抗凝剂治疗 (OAT) ?外源性凝血因子缺乏 ?肝脏疾病 (肝硬化) ?维生素K缺乏 PT试验 报告参数 S：秒数 R：比率 INR：国际标准化比率 %：百分活动度，以当地人群的正常值调 整定标血浆，用于口服抗凝剂治疗的监控 通常同时治疗，干扰须消除 PT试验 PT试剂 PT FIB HS ?ISI在 1.3-1.5，来源于兔脑组织 ?为冻干粉试剂，需要使用蒸馏水溶解 ?正常参考值约为：11-15秒 PT试验 PT试剂 RPT ?ISI在 1.0以下，来源于重组 ?为冻干粉试剂，需要使用配套的缓冲 液溶解 ?正常参考值约比前者短1.5秒 PT试验 ?反应过程： 血浆样本(50uL) + PT试剂(100uL) = 纤维蛋 白形成 APTT试验 脑磷脂 + CaCl2 XIIa XII XI XIa IX IXa X Xa Va VIIIa VIIIa 纤维蛋白原 凝血酶原 (II因子) 凝血酶 (活化的 II因子) 测定时间(秒) 纤维蛋 白凝块 APTT试验 活化部分凝血酶原时间 临床应用: ?术前监测 ?肝素治疗 (UFH) ?内源性凝血因子缺乏 (XII, XI, IX, VIII) ? HYPERLINK /chanpin/ 狼疮抑制物 (抗磷脂抗体) APTT试验 APTT试剂 ?APTT Ly：冻干粉试剂，需要加入蒸馏水 溶解 ? APTT Sys：液体试剂，无须配制，直接使 用 ?都含氯化钙试剂 APTT试验 ?反应过程: 血浆样本(50uL) + APTT试剂(50uL) + 氯化钙 试剂(50uL) = 纤维蛋白形成 TT试验 凝血酶时间 牛凝血酶* + 稀释液 凝血酶原 凝血酶 纤维蛋白原 纤维蛋白 (凝块) TT试验 凝血酶时间 临床意义 肝素治疗控制 播散性血管性凝血(DIC) 凝血酶缺乏 纤维蛋白原缺乏 TT试验 试剂 ?纯化的凝血酶试剂，冻干粉；浓缩缓冲液 ?配制的容量不同，有2、5、8 mL三种，2mL 专用于肝素治疗的监控，5、8mL用于常规筛 查。 正常参考范围：11-18秒 (5 mL) 16-27秒 (8 mL) ?配制时先配缓冲液，比例为1：4（1mL浓缩 缓冲液 +4mL蒸馏水） 再分别取2、5、8mL加入冻干粉试剂中即可 TT试验 ?反应过程： 血浆样本(75uL) + TT试剂(75uL) = 纤维蛋白 形成 FIB-Clauss法 牛凝血酶 (过量) + 稀释液 Fibrinogen Fibrin (纤原) (纤维蛋白) FIB-Clauss法 纤维蛋白实测法 临床意义 ?纤维蛋白先天缺乏 ?获得性 DIC ?系统性纤溶 ?胰腺炎及重症肝病 FIB-Clauss法 ?纯化的凝血酶 ?需要定标 ?线性范围好0.7-7.0 g/L FIB-Clauss法 试剂: 冻干粉,需要蒸馏水溶解 定标及检测需要因子稀释液 纤维蛋白测定法 纤维蛋白测定法 ?定标血浆中含有已知浓度的纤维蛋白,在仪器上稀 释后检测，得到一条定标曲线，是关于浓度与检 测值之间的定标曲线 ?注：在血凝分析中，所有浓度（活性）的检测需 要定标，而秒数的分析无须定标 PT衍生法 ?定标血浆每一个稀释度的光散差 (delta)和相应的纤维蛋白浓度成正 比 PT衍生法测定纤维蛋白原 光散度 100% 与纤维蛋白原 浓度成比例 Δ 50% 25% 时间 PT反应定标曲线 PT衍生法 mg/dL or g/L D