转基因棉花的检测外源基因及检测标准.docVIP

转基因棉花定性和实时荧光定性PCR检测 检测基因 基因来源 参考标准 检测低限 PCR性质 结果描述 18s rDNA 内源 SN/T 1199-2010 棉花中转基因成分定性PCR检验方法 0.1% 定性PCR 1. 如果阴性对照和空白对照未出现扩增条带，阳性对照、内源基因（18s rDNA）和测试样品均出现预期大小的扩增条带，则可初步判断有可疑的该外源基因，应进一步做实时荧光PCR等确证实验，然后依据确证实验结果最终报告 2. 如果测试样品中未出现PCR扩增产物，则可判定测试样品中不含有该外源基因 CaMV 35S 外源 0.1% 定性PCR Nos 外源 0.1% 定性PCR Gus 外源 0.1% 定性PCR NptⅡ 外源 0.1% 定性PCR Cry IA (c) 外源 0.1% 定性PCR Cry IA (b)+ Cry IA (c) 外源 0.1% 定性PCR CpTⅠ 外源 0.1% 定性PCR acp1 内源 0.1% 实时荧光定性PCR 1. 测试样品内源基因检测Ct值小于或等于36，外源基因检测Ct值大于或等于40，判断该样品不含所检的外源基因； 2. 测试样品内源基因检测Ct值小于或等于36，外源基因检测Ct值小于或等于36，判断该样品含有所检的外源基因； 3. 测试样品外源基因检测Ct值在36-40之间，应调整模板浓度，重做实时荧光PCR。 再次扩增后的外源基因Ct值仍小于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，则可判定该样品检测该外源基因。再次扩增后的外源基因Ct值大于或等于40，且阴性对照，阳性对照和空白对照结果正常，则可判定该样品未检出该外源基因。 Mon531品系特异基因 外源 0.1% 实时荧光定性PCR Mon15985品系特异基因 外源 0.1% 实时荧光定性PCR Mon1445品系特异基因 外源 0.1% 实时荧光定性PCR Sad1 内源 农业部1485号公告-10-2010 转基因植物及其产品成分检测耐除草剂棉花LLcotton25及其衍生品种定性PCR方法 0.1% 定性PCR 1. SadⅠ内标基因和LLcotton25转化体特异性序列均得到扩增，且扩增片段大小与预期片段大 小一致，则为：样品中检测出转基因耐除草剂棉花LLcotton25转化体成分，检测结果为阳性； 2. SadⅠ内标基因扩增出与预期片段大小一致的条带，而LLcotton25转化体特异性序列未得到扩增，则为：样品中未检测出转基因耐除草剂棉花LLcotton25转化体成分，检测结果为阴性； 3. SadⅠ内标基因未得到扩增，或扩增片段与预期片段大小不一致，表明样品中未检出SadⅠ基因，则为：样品中未检出棉花成分，检测结果为阴性。 LLcotton25转化体特异性序列 外源 0.1% 定性PCR Bt 外源 农业部1485号公告-11-2010 转基因植物及其产品成分检测抗虫转Bt基因棉花定性PCR方法 0.1% 定性PCR 1. SadⅠ内标基因和Bt基因均得到扩增，且扩增片段大小与预期片段大小一致，则为：样品中检测出抗虫转Bt基因棉花成分，检测结果为阳性； 2. SadⅠ内标基因扩增出与预期片段大小一致的条带，而Bt基因未得到扩增，则为：样品中未检测出抗虫转Bt基因棉花成分，检测结果为阴性； 3. SadⅠ内标基因未得到扩增，或扩增片段与预期片段大小不一致，表明样品中未检出SadⅠ基因，则为：样品中未检出棉花成分，检测结果为阴性。 MON88913转化体特异性序列 外源 农业部1485号公告-12-2010 转基因植物及其产品成分检测耐除草剂棉花MON88913及其衍生品种定性PCR方法 0.1% 定性PCR 1. SadⅠ内标基因和MON88913转化体特异性序列转化体特异性序列均得到扩增，且扩增片段大小与预期片段大 小一致，则为：样品中检测出转基因耐除草剂棉花MON88913转化体特异性序列转化体成分，检测结果为阳性； 2. SadⅠ内标基因扩增出与预期片段大小一致的条带，而MON88913转化体特异性序列转化体特异性序列未得到扩增，则为：样品中未检测出转基因耐除草剂棉花MON88913转化体特异性序列转化体成分，检测结果为阴性； 3. SadⅠ内标基因未得到扩增，或扩增片段与预期片段大小不一致，表明样品中未检出SadⅠ基因，则为：样品中未检出棉花成分，检测结果为阴性。 MON15985转化体特异性序列 外源 农业部1485号公告-13-2010 转基因植物及其产品成分检测抗虫棉花MON15985及其衍生品种定性PCR方法 0.1% 定性PCR 1. SadⅠ内标基因和MON15985转化体特异性序列转化体特