【2017年整理】平面色谱法(山西医科大学).docVIP

第十九章 平面色谱法 平面色谱法（plane chromatography）是组分在以平面为载体的固定相和流动相之间吸附或分配平衡而进行的一种色谱方法。该法具有操作简单，不需要昂贵的仪器设备，分析速度快，结果直观，并有较高的分离能力。平面色谱法主要包括薄层色谱法（thin layer chromatography；TLC）和纸色谱法（paper chromatograph）。纸色谱法出现于20世纪的40年代，主要用于微量分析，特别在生化和医药分析中的应用十分广泛。但色谱纸的机械强度较差，传质阻力大，使该法的应用和推广受到了限制。20世纪60年代，薄层色谱法的发展和普及，使得纸色谱法的应用逐渐减少。20世纪80年代出现了仪器化薄层色谱法（instrumental thin layer chromatography），薄层色谱的每一步骤均由仪器来代替以往的手工操作，再配以薄层扫描仪，这样就使在较长时期内被认为只能用来定性和半定量的薄层色谱法定量结果的重现性和准确度大大提高，成为一种有价值的分离分析方法。 平面色谱法的分类和原理 平面色谱法的分类 平面色谱法按操作方式可分为： 1．薄层色谱法 薄层色谱法是把固定相均匀地涂布在玻璃板、塑料板或铝箔上形成厚薄均匀的薄层，在此薄层上进行混合组分分离的色谱法。按照薄层色谱法的分离机制不同，薄层色谱法又可分为吸附薄层色谱法、分配薄层色谱法和分子排阻薄层色谱法。 2．纸色谱法 纸色谱法的固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为与水互不相溶的有机溶剂，根据被分离混合组分在水和有机溶剂中的溶解能力不同，在色谱纸上产生差速迁移而得到分离的方法。纸色谱分离原理属于分配色谱的范畴。 3．薄层电泳法 薄层电泳法是带电荷的被分离物质（蛋白质、核苷酸、多肽、糖类等）在纸、醋酸纤维素、琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶等惰性支持体上，以不同速度向其电荷相反的电极方向泳动，产生差速迁移而得到分离的方法。薄层电泳法属于平面色谱范围，但由于电泳与色谱的驱动力、仪器设备及测定对象与薄层色谱法及纸色谱法有较大差别，故本章不予介绍。 平面色谱法参数 平面色谱与柱色谱的基本原理相同，但操作方法不同，故各种参数也不完全相同。以下主要介绍平面色谱法的定性参数、相平衡参数、面效参数和分离参数。 （一）定性参数 薄层色谱的定性参数是色谱过程热力学特性参数，包括比移值与相对比移值。 1．比移值（retardation factor；Rf） 比移值是在一定条件下，溶质移动距离与流动相移动距离之比。是平面色谱法中用来表征平面色谱图上斑点位置的基本参数，也是平面色谱法用于定性的基本参数。 （19-1） 式中L为原点（origin）至斑点中心的距离，L0为原点至溶剂前沿（solvent front）的距离（见图19-1）。当Rf =0时，组分不随流动相展开，停留在原点，表示组分在固定相上完全保留；当Rf =1时，组分随流动相展开至溶剂前沿，表示组分在固定相上完全不保留。所以Rf值在0~1之间。在实际工作中，Rf值适宜范围是0.2~0.8，最佳范围是0.3~0.5。 图19-1 平面色谱示意图 由于Rf受被分离组分的结构和性质，固定相和流动相的种类和性质，展开室内的饱和度、温度等多因素的影响。在不同实验室或不同实验者间进行同一化合物Rf值的比较是很困难的。 2．相对比移值（relative retardation factor；Rr） 相对比移值是在一定条件下，被测组分的比移值与参考物质比移值之比。 （19-2） 式中Rf (i)和Rf (s)分别为组分i和参考物质s在相同条件下的比移值。L(i)和L(s) 分别为组分i和参考物质s在平面色谱上的移动距离。 相对比移值在一定程度上消除了测定中的系统误差，因此与比移值相比具有较高的重现性和可比性。测定Rr时，可以选择纯物质加到试样中作为参考物质，也可以是试样中的某一已知组分。Rr可以大于1，也可以小于1。Rr与被测组分、参考物质、色谱条件等因素有关。 （二）相平衡参数 1．分配系数（distribution coefficient；K）和保留因子（retention factor；k） 平面色谱法中的相平衡参数也可用分配系数和保留因子来描述（见第十六章 色谱法概论）。 2．K、k与Rf值之间的关系 设R为单位时间内一个分子在流动相中出现的几率（即在流动相中停留的时间分数），若R=1/3，则表示这个分子有1/3的时间在流动相中，2/3的时间在固定相中。对于具有统计意义的大量待测组分分子而言，则表示1/3的分子在流动相中， 2/3的分子在固定相中。组分在固定相与流动相