外源一氧化氮促进小麦种子萌发及其信号作用机制研究.docVIP

分子生物学论文 外源一氧化氮促进小麦种子萌发 及信号机制研究 目 录摘 要 I ABSTRACT III 缩略语词汇表 V 引言 1 文献综述 3 Ⅰ 种子萌发机理的研究进展 3 Ⅱ 谷物种子中淀粉的降解及其水解酶 16 Ⅲ 植物一氧化氮（NO）研究进展 20 参考文献 25 第一部分 NO供体对渗透胁迫下小麦种子萌发与抗氧化代谢的影响 33 第一章 NO供体对渗透胁迫下小麦种子吸胀萌发和水解酶活性的影响 33 1 材料与方法 35 2 结果与分析 37 3 讨论 44 第二章 NO供体对渗透胁迫下小麦种子萌发过程中抗氧化代谢的调控 50 1 材料与方法 51 2 结果与分析 53 3 讨论 58 第二部分 小麦种子萌发早期(-淀粉酶对NO的快速应答及其生化特性研究 61 第三章 小麦种子萌发早期(-淀粉酶对NO的快速应答 61 1 材料与方法 63 2 结果与分析 65 3 讨论 80 第四章 小麦种子萌发早期NO诱导的(-淀粉酶同工酶的特性 84 1 材料与方法 85 2 结果与分析 86 3 讨论 91 全文结论 94 创新之处 95 存在的问题与展望 96 致谢 98 外源一氧化氮促进小麦种子萌发 及信号机制研究 摘 要 一氧化氮（Nitric oxide, NO）供体硝普钠（Sodium nitroprusside, SNP）能明显促进渗透胁迫下小麦种子的吸、萌发和胚芽胚根的生长，加速贮藏物淀粉降解为还原糖及可溶性小分子糖类；胁迫解除后，仍能维持种子较高的活力从而有利于幼苗的生长。进一步研究发现，SNP还能明显诱导胁迫下种子淀粉酶活性的上升，轻微提高蛋白水解酶活性，加速淀粉胚乳的液化或溶解，而SNP对酯酶影响不大。在探察NO对渗透胁迫下小麦种子萌发过程中抗氧化代谢时发现，一氧化氮（NO）供体硝普钠（SNP）能显著诱导渗透胁迫下CAT、APXacorbate peroxidase）活力的上升和脯氨酸含量积累，抑制LOXlipoxygenase）活性，降低H2O2与MDAmalondialdehyde）的含量，从而提高渗透胁迫下小麦种子萌发过程中抗氧化能力，为种子的正常萌发提供一个良好的细胞内环境。 有意思的是，在小麦种子正常萌发早期，SNP处理便可以显著诱导内源葡萄糖、果糖和蔗糖含量的上升；进一步采用各种糖和SNP，并结合NO清除剂处理小麦种子，发现糖信号可能也介导了萌发早期小麦种子中淀粉酶的激活机制，且与NO之间存在着对话（Cross-talk）现象。而且在正常萌发条件下NO诱导切胚半粒小麦种子萌发早期（6 h）的淀粉酶活力上升可能与GA3无直接相关。并对NO诱导小麦种子淀粉酶活力的可能信号作用机理及其与GA、糖信号通路的关系进行了探讨。 进一步研究外源一氧化氮（NO）与赤霉素（GA）对小麦种子萌发早期（12h）淀粉酶调控的信号机制发现，在萌发早期（12h内），α-淀粉酶和(-淀粉酶都不受GA所调控；而(-淀粉酶对NO存在着快速应答现象，但是，α-淀粉酶却没有这种应答关系。NO诱导(-淀粉酶活性的迅速上升可能与游离态(-淀粉酶聚合体的解聚以及结合态(-淀粉酶的直接释放有关；而NO促进的蛋白水解酶活性的轻微上升，对(-淀粉酶的激活或释放没有贡献；而且NO对(-淀粉酶单体也没有激活效应。此外，我们的研究结果还表明，(-淀粉酶对NO的快速应答现象同样存在于其它物种，如大麦、大豆、水稻、西瓜、抑南芥等种子的萌发早期，暗示了(-淀粉酶对NO的快速应答可能是种子萌发早期的一个普遍机制。 采用β-淀粉酶活性大小存在差异的三个小麦品种研究发现，β-淀粉酶活性与种子的萌发速率呈正相关，同时也暗示了，在正常条件下，高活性或高含量的β-淀粉酶可能是促进种子萌发的诱因之一。同时结合β-淀粉酶抑制剂的实验结果也表明，β-淀粉酶在小麦种子萌发过程中起着重要作用。 研究小麦种子萌发早期NO诱导的(-淀粉酶同工酶的特性发现，萌发早期小麦种子中的(-淀粉酶最适pH为4.5-6.5，在pH3.0-9.0范围内较稳定；最适温度为40℃，高于55℃时活力丧失表现了其对热的不稳定性；自由态的种子中预存的自由态I型β-淀粉酶同工酶pI在4.8-6.0范围，中性偏酸；依赖于NO而产生的II型β-淀粉酶同工酶的pI在6.0-7.0范围，偏中性。抑制剂实验表明，萌发早期所有的β-淀粉酶均含有巯基。进一步采用蛋白质合成抑制剂表明，依赖于NO诱导的β-淀粉酶同工酶在萌发早期（12h）不是从头合成的。 关键词： 一氧化氮；种子萌发；渗透胁迫；小麦（Triticum aestivum L.）；赤霉素；β-淀粉酶  SIGNAL MECHANISMS OF EXOGENOUS NITRIC OXIDE ON THE PROMOTIO