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09923FCM激光流式细胞计08318

激光流式细胞计 (Flow?Cyto-meter, FCM ) 荧光激活细胞分选器 (Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS) 主要内容 概述 流式细胞术发展史 流式细胞仪构造和工作原理 流式细胞仪的主要技术指标 应用 一、概述 流式细胞仪(Flow?Cyto-meter?简称FCM)是一项集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、计算机技术以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说,流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的、快速的定量分析和分选的技术。FCM技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的工具。 FCM仪器分为二大类: 1.台式机:仪器的光路调节系统固定,自动化程度高,操作简便,易学易掌握。B-D公司的临床型FCM?FACScan也是最早获得美国FDA批准可用于临床诊断的仪器。 2.大型机:可快速将所感兴趣的细胞分选出来,并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上,同时可选配多种波长和类型的激光器,适用于更广泛更灵活的科学研究应用。 流式细胞术发展史 1930年,Caspersson?和Thorell开始致力于细胞的计数。 1934年,Moldaven?是世界上最早设想使细胞检测自动化的人,他试图用光电?仪记录流过一根毛细管的细胞。 1940年,Coons?提出用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白。 1947年,Guclcer?运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数器 1949年,Wallace?Coulter?提出在悬液中计数粒子的方法的专利。 1950年,Caspersson?用显微分光光度计的方法在UV和可见光光谱区检测细胞。 1953年,Croslannd-Taylor?应用分层鞘流原理,成功设计红细胞光学自动数器。 同年,Parker?和Horst?描述一种全血细胞计数器装置,成为流式细胞仪的雏形。 1954年,Beirne?和Hutcheon?发明光电粒子计数器 1965年,Kamemtsky等提出两个设想,一是用分光光度计定量细胞成分;二是结合测量值对细胞分类。 1969年,Van?Dilla,Fulwyler及其同事们在Los?Alamos,NM(即现在的National? Flow?Cytometry?Resource?Labs)发明第一台荧光检测细胞计。 1972年,Herzenberg?研制出一个细胞分选器的改进型,能够检测出经过荧光标记抗体染色的细胞的较弱的荧光信号。 1975年,Kohler?和Milstein?提出了单克隆抗体技术,为细胞研究中大量的特异的免疫试剂的应用奠定了基础。 1973年,BD公司与美国斯坦福大学合作,研制开发并生产了世界第一台商用流式细胞仪FACS?I。 从此,大量的厂家不断研制生产出自己的流式细胞仪,流式细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。科学家们、仪器制造商们又纷纷将研究焦点转向荧光染料的开发、细胞的制备方法和提高电子信号的处理能力上来。 九十年代,流式细胞术作为一门生物检测技术已日臻完善,应用领域的日趋广泛。而今,流式细胞仪已经深入到生物学、医学、药物学等的各个分支领域。 流式细胞仪构造和工作原理 构建图 工作原理图 原理概述 激光流式细胞计通过一个精密的流动室与流动系统,使染色细胞排成一列,高速度地逐个通过激光照射区,由荧光探针标记的细胞即染色细胞在激光的照射下产生荧光和散射光。通过测定每个细胞的荧光和散射光,即可对细胞的化学成分和物理性质进行快速定量分析。 所谓荧光探针标记,就是将细胞或染色体浸泡在不同的染料之中,加染料后,细胞或染色体在激光的照射下会发出不同的荧光光谱。 如用呀啶橙标记细胞中的碳酸,其绿色荧光(峰值530nm)反映双链核酸(DNA及RNA双链部分的含量),红色荧光(峰值640nm)反映单链核酸(RNA单链部分及变性DNA)的含量。荧光强度与细胞内的待测物质含量成正比。 而激光的光散射信号是由细胞的衍射,折射和反射组成的。光散射的强度取决于细胞的大小,形状,密度和荧光探针的吸收特征等因素。 待测的光散射信号包括小角(前向)散射和90o光散射。小角(0.5-2.0o)散射主要反映细胞大小的信息。90o即与入射光垂直方向散射,主要反映细胞结构的信息。 这里的角度指的是激光束照射方向与收集散射光信号的光电倍增管轴向方向之间大致所成的角度。 一般说来,前向角散射光的强度与细胞的大小有关,对同种细胞群体随着细胞截面积的增大而增大;对球形活细胞经实验表明在小立体角范

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