玩「酶」主义-钙离子对於淀粉酶活性作用之探讨.doc

玩「酶」主義 - 鈣離子對於澱粉酶活性作用之探討 摘要 日常生活裡常聽到的「酵素」與「酶」其實都是指同樣的東西，是一種蛋白質組成的催化劑。我們在課後探索酵素活性的過程當中，發現「鈣離子」在許多酵素反應中參與了重要的角色，使我們聯想到是否鈣離子對於澱粉酶活性也會有所影響？所以我們使用EGTA(鈣離子螯合劑些非蛋白質的小分子會加入酵素構造中，以幫助催化反應進行。負責RNA降解的一個重要酵素 研究目的 觀察並探討鈣離子與直接取自人體的人類唾液澱粉酶活性之相對關係。 觀察並探討鈣離子與純化過的人工唾液澱粉酶活性之相對關係。 觀察並探討鈣離子對於綠豆發芽狀況。 觀察並探討鈣離子對於綠豆發芽時澱粉分解速率之相對關係。 本實驗與高二生命科學第一章第一節、與高三生物第二章第一節、第四章第三節相關。實驗材料：人類口水磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、、、實驗器材： 燒杯、試管、培養皿、研缽、滴管、微量天平、秤量紙、藥匙、藥品配置： (一)磷酸鹽緩衝溶液(0.02M，pH6.9)：磷酸氫二鈉溶液：5.68 g 溶於 1 升水中磷酸二氫鈉溶液：4.80 g 溶於 1 升水中兩溶液以 1：1 的比例混合。(二)澱粉液(%):稱取5.00g可溶性澱粉於小燒杯中，加入約20ml水，攪拌使成懸浮液，然後將懸浮液邊攪拌邊緩慢倒入盛有約80mL沸騰水的大燒杯中，冷卻待用。肆、研究過程與方法 整體實驗我們將它分為以下四階段操作並分別將過程列述如下： 一、EGTA /鈣離子/鋅離子/鎂離子對於直接取自人體的人類唾液澱粉酶活性之影響 (一)收集人類唾液5ml於試管中，以磷酸鹽緩衝溶液稀釋混搖至10ml，標示為A液待用。 (二)將標準澱粉液分裝成五管，標示號碼為1,2,3,4,5其內含不同處理如下表所示: 組別 1號試管 2號試管 3號試管 4號試管 5號試管 溶液條件 5%澱粉 10ml 5%澱粉 0.02M EGTA 10ml 5%澱粉 0.02M CaCl2 10ml 5%澱粉 0.02M ZnCl2 10ml 5%澱粉 0.02M MgCl2 10ml (三)各組於室溫下加入1ml之A液，並且開始計時。 (四)各組每隔20分鐘取2ml反應溶液於試管內並加入0.5ml之本氏液，於沸水中隔水加熱10分鐘後取出並加以拍照紀錄其顏色變化。 二、EGTA /鈣離子/鋅離子/鎂離子對於純化後的人類唾液澱粉酶活性之影響 (一)純化人類唾液澱粉酶以磷酸鹽緩衝溶液稀釋混搖至5ml，標示為B液待用。 (二)將標準澱粉液分裝成五管，標示號碼為1,2,3,4,5其內含不同處理如實驗（上列圖表）所示。 (三)各組於室溫下加入1ml之B液，並且開始計時。 (四)各組每隔20分鐘取2ml反應溶液於試管內並加入0.5ml之本氏液，於沸水中隔水加熱10分鐘後取出並加以紀錄。 三、鈣離子/EGTA對於綠豆發芽之影響 (一)挑選新鮮綠豆60顆分三組，每組20顆置於玻璃培養皿內。 (二)將各組標示1,2,3號並以下表各條件之溶液浸泡，紀錄其發芽情況。 組別 1號培養皿 2號培養皿 3號培養皿 溶液條件 純水 30ml 0.02M EGTA 30ml 0.02M CaCl2 30ml 四、鈣離子/EGTA對於綠豆發芽時澱粉分解速率之影響 (一)將實驗三當中各組綠豆分別洗淨去種皮後以研缽搗碎，並加入10ml熱水繼續搗碎。 (二)各組靜置後，待其沉澱後各取其上清液2ml並加入0.5ml本氏液，於沸水中加熱10分鐘。再加以拍照記錄。 伍、研究結果 一、EGTA /鈣離子/鋅離子/鎂離子對於直接取自人體的人類唾液澱粉酶活性之影響 0分鐘 20分鐘 二、EGTA /鈣離子/鋅離子/鎂離子對於純化後的人類唾液澱粉酶活性之影響 三、鈣離子/EGTA對於綠豆發芽時澱粉分解速率之影響 一、上清液加本氏液(加熱前) 二、上清液加本氏液(加熱後) 陸、討論與結論 在這一系列實驗的過程，實驗中皆以簡單的器材操作，容易取得的材料，以及方便觀測的方法，對於「鈣離子與澱粉酶活性的相對關係」此一主題作反覆的探索，把酵素活性的研究「簡單化」、「有趣化」，以眼睛看的到的顏色變化來做觀察，利用我們手邊所能簡單操作的實驗器具與藥品，清楚的呈現鈣離子對於澱粉酶的活性調控之重要性。讓我們了解到除了課程中所提及的「溫度」與「酸鹼度」之外，小小的「鈣離子」對酵素活性作用以至於個體生理作用是有如此重大且顯著的影響，也更近一步了