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* 青霉素 — 根据抑制作用的原理设计药物的一个例子 Muropeptide (胞壁肽) ?1?4 Penicillin prevents the synthesis of cross-links 肽聚糖 — 细菌细胞壁的主要成分 胞壁肽 — 肽聚糖的结构单位 糖肽转肽酶 — 细菌细胞壁合成过程中催化肽聚糖的交联 青霉素 (一种抗生素) — 自杀性底物，通过与酶活性中心的Ser共价结合 — 不可逆抑制 Penicillin * Inhibition of glutamine amidotransferases for cancer treatment Gln ? Glu Inhibitors * 酶浓度 底物浓度 – 底物抑制 产物浓度 – 产物抑制 pH – 最适pH 反应温度 – 最适温度 缓冲溶液的类型 离子强度 激活剂 抑制剂 4. 影响酶活性的因素 II. Enzyme kinetics P.378 Vo = kcat[E]o[S] Km + [S] kcat = A e-Ea/RT * pH 对酶活性的影响 每一个酶有一个最适pH： 变化范围：pH 1.5-9.7 胃蛋白酶：pH ~ 2 糜蛋白酶：pH ~8 碱性磷酸酶：pH ~ 9.6 对酶的影响： 影响活性中心的电离状态 影响酶的二/三级结构 对底物的影响 II. Enzyme kinetics * 反应温度对酶活性的影响 每一个酶有一个最佳反应温度 反应温度的影响 低于最佳温度： T?, V? 底物基态能级提高 ? Ea? Q10 = 2 高于最佳温度： T?, V? T? ? 热变性 ?酶失活 影响最佳反应温度的因素： pH 离子强度 缓冲溶液类型 …… Effect of reaction temperature on activity of alkaline phosphatase in DEA buffer (0.1 M, pH 9.8) in the presence of different inorganic salts (0.8 M) *Yang Z, Liu X-J, Chen C, *Halling PJ. Biochim. Biophys. Acta (in press) * III. 酶的作用机制 酶的活性部位 酶和底物之间的相互作用 一些活性功能团对酶催化的影响 胰凝乳蛋白酶 P.384 * 活性中心的作用：结合底物并催化其转化成产物 有两个部分： 结合点和催化点 位于酶分子表面的一个裂缝中 是一个三维实体 只占整个酶分子体积的1-2% 1. 酶的活性中心 III. Enzyme mechanism P.384 四氢叶酸还原酶 NADP+ 四氢叶酸 * 非共价结合 邻近效应 -- 104 定向效应 -- 104 互补效应 2. 酶和底物之间的相互作用 III. Enzyme mechanism P.388 反应速度提高108-倍 分子间的反应 ? 分子内的反应 * Proximity effect Orientation effect III. Enzyme mechanism * 酶和底物之间的互补结合 疏水/亲水性质 电荷 分子大小 分子形状 弹性蛋白酶 R1 = Gly, Ala 胰蛋白酶 R1 = Lys, Arg 胰凝乳蛋白酶 R1 = Phe, Trp, Tyr 三种丝氨酸蛋白酶的底物专一性： P.408, Fig.10-35 * 酶和底物之间的互补性结合的两个模型 “Lock and key” (锁钥理论) – Fischer (1894) An enzyme is structurally complementary to its substrate, fitting together like a “lock and key” “Induced fit” (诱导契合理论) – Koshland (1958) Interaction of a protein and its substrate involves changes in the conformation of one or both, resulting in a complementarily nice fit. Induced fit in hexokinase D-glucose The process is truly interactive – inducing a change in conformations of both enzyme and substrate. III. Enzyme mechanism * Enzyme-Substrate Complementary Interaction酶的活性中心会