9免疫学应用讲解.ppt

* 抗原抗体反应特点 特异性： 一种抗原通常仅能与由它刺激所产生的抗体结合。 分子基础：抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性 可见性： 抗原与抗体反应的体系中，若两者的浓度和比例适当，则形成的抗原抗体复合物体积大、数量多，出现肉眼可见的反应。 可逆性： 抗原-抗体反应为分子表面的非共价结合，结合虽稳定但可逆。在一定条件下（如低pH、高浓度盐、冻融等），可被解离。根据此特点，可借助亲和层析法纯化抗原或抗体。 。 抗原抗体反应的影响因素 时间 电解质 温度 酸碱度 （二）抗原或抗体的检测方法 1、凝集反应（agglutination reaction） 细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被有抗原的颗粒状物质（如聚苯乙烯乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象，称为凝集反应。 直接凝集反应 直接凝集反应(direct agglutination)： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。 参与反应的抗原称为凝集原，相应的抗体称为凝集素。 间接凝集反应 间接凝集反应(indirect agglutination): 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象. 载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 凝集颗粒 间接凝集试验示意图 间接凝集抑制试验 免疫妊娠试验（1） 免疫妊娠试验（2） 2、沉淀反应（Precipitation reaction） 毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应 。沉淀反应可在液体中进行，也可以在半固体琼脂凝胶中进行。 沉淀反应包括： 单向免疫扩散 双向免疫扩散 免疫电泳 免疫比浊 3、免疫标记技术（immunolabeling techniques） 为了提高单纯的抗原和抗体检测的灵敏性，将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原抗体复合物。 常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。 标记物 荧光素 酶 放射性核素 免疫荧光法 酶免疫测定（EIA) 放射免疫测定（RIA) 化学发光物质 化学发光分析 免疫酶测定法（enzyme immunoassay, EIA） 应用最广泛的方法是酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 间接法：检测抗体 包被Ag 加入待检Ab 加入酶标二抗 加入底物显色 夹心法：检测抗原 包被Ab 加入待检Ag 加入酶标二抗 加入底物显色 免疫荧光技术 荧光素标记的抗体（抗原）与组织或细胞中的相应抗原（抗体）结合，借助于荧光显微镜或流式细胞仪对抗原（抗体）进行鉴定或定位。 直接免疫荧光法 间接免疫荧光法 放射免疫检测 用放射性核素标记抗原抗体的检测技术，常用的有125I、131I 灵敏度高可检测一些微量物质 （二）免疫细胞功能的测定 淋巴细胞转化实验 T细胞表面含有有丝分裂原受体,能接受植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）或美州商陆（PWM）等有丝分裂原的刺激，转化成为淋巴母细胞。 通过淋巴母细胞的计数确定转化率 2、E花环形成试验（ E Rosette Test ） T细胞 CD2/E受体 SRBC/ 绵羊红细胞 可用于鉴定人外周血中的T细胞并计数。 谢 谢 酶联免疫斑点法（Enzyme-Linked Immunospot, ELISPOT) 是在ELISA的基础上建立的检测抗体生成细胞及细胞因子产生细胞的方法。 CK抗体包被的反应板 CK 抗原包被的反应板 加入淋巴细胞 加入酶标记二抗 加入底物 检测抗原特异性B细胞 加入底物 T细胞产生CK的检测 加入淋巴细胞 加入酶标的CK抗体 淋巴细胞转化试验（形态学示意图） 原理：人T细胞表面有PHA或ConA受体，T细胞在体外受PHA或ConA的刺激后能转化为体积较大、代谢旺盛、且能进行分裂的淋巴细胞，以此测定T细胞的功能。 PHA刺激 48~72小时 B细胞功能测定 1、抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验 思考题 名词解释：凝集反应，沉淀反应 间接ELISA和夹心ELISA的基本步骤 第九章 免疫学应用 目的要求 （一）掌握人工主动免疫和被动免疫的概念和特点。 （二）熟悉常用的疫苗； （三）了解免疫学诊断常用的方法 。 免疫学防治 应