第八章真核生物基因表达调控讲解.ppt

Two-hybrid assay (protein-protein) Tri-hybrid assay (protein-RNA) Interaction Assays Design of Two-hybrid / Three-hybrid /etc… 基因调控的顺式作用元件 是指基因周围能与特异转录因子结合而影响转录的DNA序列。其中主要是起正性调控作用的顺式作用元件，包括启动子(promoter)、增强子(enhancer)；近年又发现起负性调控作用的元件:沉默子(silencer)。 增强子：一种能够提高转录效率的顺式调控元件，可使旁侧的基因转录提高100倍。可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。 增强子 增强子成分 增强子成分 小于100bp 增强子元 增强子元 小于5bp + 特异激活蛋白 + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 促进转录的复合体 增强子元 增强子元 小于5bp + 特异激活蛋白 + 特异激活蛋白 促进转录的复合体 促进转录的复合体 增强子的结构 增强子增强转录主要是按一种成环模式实现其远距离、双方向的增强功能。 增强子的作用有以下特点： 增强子提高同一条DNA链上基因转录效率，可以远距离作用。 增强子作用与其序列的正反方向无关，将增强子方向倒置依然能起作用。 增强子要有启动子才能发挥作用，对启动子没有严格的专一性，同一增强子可以影响不同类型启动子的转录。 增强子的作用机理虽然还不明确，但与其他顺式调控元件一样，必须与特定的蛋白质因结合后才能发挥增强转录的作用。 Compaction Sliding Looping Regulatory mechanism from a distance Why do enhancers act independent of distance and orientation? 绝缘子 是一段具有特化染色质结构的区域，它能阻断增强子或沉默子对靶基因/启动子的增强或失活作用效应。而且能保护两个绝缘子之间的基因免受任何外界因子的作用与影响。 基因调控的信号传导 The regulatory region of a human metallothionein gene contains regulator elements in both its promoter and enhancer. The promoter has elements for metal induction; an enhancer has an element for response to glucocorticoid. Promoter elements are shown above the map, and proteins that bind them are indicated below. Each gene contains multiple response elements 组蛋白的调控 组蛋白化学修饰发生在组蛋白N端尾部，尤其是组蛋白H3和H4的修饰起始了染色质结构的变化。组蛋白尾部由20个氨基酸组成，并且从DNA转弯处的核小体间延伸出来。 组蛋白的化学修饰 组蛋白化学修饰的类型： 多数化学修饰的化学基团可以减少组蛋白的正电性，从而使其与DNA结合变疏松，使染色质结构发生变化。 组蛋白（去）乙酰化 De/Acetylation 组蛋白甲基化 Methylation 组蛋白磷酸化 Phosphorylation 组蛋白泛素化 Ubiquitination 组蛋白糖基化 ADP-Rybosilation 组蛋白与Swi/Snf复合体的结合 Swi/Snf complex, which, in vitro, uses the energy of ATP hydrolysis to disrupt histone-DNA interactions Zhang Y., Reinberg D. Genes Dev. 2001;15:2343-2360 Sites of post-translational modifications on the histone tails 组蛋白的乙酰化：主要发生在Lys，Arg，His，激活基因。 组蛋白乙酰转移酶（histone acetyltransferase，HAT） 组蛋白去乙酰化酶（histone acetylase，HDAC） 组蛋白乙酰化使组蛋白携带正电荷量减少，降低其与带负电荷的DNA链的亲和性，导致局部DNA与组蛋白八聚体解开缠绕，从而促使参与转录调控的各种蛋白因子与DNA特异序列结合，进而发挥转录调控作用； 组蛋白乙酰化激活基因转录的机制 组蛋白的N末端尾巴可与参与维持染色质高级结构的多种蛋白质相互作用，更加稳定了核小体的结构。