丙二醛含量测定方法.pptVIP

植物组织或器官中丙二醛含量的测定 一、实验目的 1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。 2.了解丙二醛积累对细胞的伤害 二、实验原理： 硫代巴比妥酸 TBA 丙二醛 3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮 （三甲川） 逆境 膜脂的过氧化作用 丙二醛 酸性 棕红色(最大吸收峰 在532nm) 三、实验材料： 受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）： 实验仪器： 紫外可见分光光度计 离心机 四、实验步骤： 1 MDA的提取 称2g叶片，加入10％三氯乙酸(TCA)2ml及少量石英砂，研磨；进一步加入8mlTCA充分研磨，接着把匀浆液以4000r／min离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA显色反应及测定 取2ml MDA提取液（对照组取2ml 蒸馏水），在加2ml 0.6％TBA混匀，在试管上加棉塞，置沸水中加热15min，迅速拿出水浴锅冷却，以4000r／min离心15min ，于波长532nm和450nm下测定OD值。 五、结果计算 以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(μmol/L)=6.45OD532-0.56OD450 D450、D532分别代表450nm、532nm波长下的光密度值。 六、注意事项： 0.1-0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmol·L-1） 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 求职应注意的礼仪 求职时最礼貌的修饰是淡妆 面试时最关键的神情是郑重 无论站还是坐，不能摇动和抖动 对话时目光不能游弋不定 要控制小动作 不要为掩饰紧张情绪而散淡 最优雅的礼仪修养是体现自然 以一种修养面对两种结果 必须首先学会面对的一种结果----被拒绝 仍然感谢这次机会，因为被拒绝是面试后的两种结果之一。 被拒绝是招聘单位对我们综合考虑的结果，因为我们最关心的是自己什么地方与用人要求不一致，而不仅仅是面试中的表现。 不要欺骗自己，说“我本来就不想去”等等。 认真考虑是否有必要再做努力。 必须学会欣然面对的一种结果----被接纳 以具体的形式感谢招聘单位的接纳，如邮件、短信 考虑怎样使自己的知识能力更适应工作需要 把走进工作岗位当作职业生涯的重要的第一步，认真思考如何为以后的发展开好头。 Thank you * 植物组织或器官在衰老或逆境下遭受伤害，往往发生膜脂的过氧化作用。膜脂过氧化的指标有很多，如丙二醛（MDA）的产生、过氧化物的碘量滴定、氧吸收、共轭双键测定等。由于MDA的测定方法简便，所以常用来评价植物脂过氧化强弱的指标。 测定组织或器官脂质的过氧化反应所产生的丙二醛含量时，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性下加热与组织中的MDA产生显色反应，反应产物是粉红色的3,5,5-三甲基噁唑2,4-二酮。用分光光度计测定532nm及600nm波长时的光密度值，根据光密度的大小可计算MDA含量。 * 10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸，先加少量的氢氧化钠（1 mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定容；石英砂。 * 植物组织或器官在衰老或逆境下遭受伤害，往往发生膜脂的过氧化作用。膜脂过氧化的指标有很多，如丙二醛（MDA）的产生、过氧化物的碘量滴定、氧吸收、共轭双键测定等。由于MDA的测定方法简便，所以常用来评价植物脂过氧化强弱的指标。 测定组织或器官脂质的过氧化反应所产生的丙二醛含量时，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性下加热与组织中的MDA产生显色反应，反应产物是粉红色的3,5,5-三甲基噁唑2,4-二酮。用分光光度计测定532nm及600nm波长时的光密度值，根据光密度的大小可计算MDA含量。 * 10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸，先加少量的氢氧化钠（1 mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定容；石英砂。