分子标记技术在凡纳滨对虾遗传多样性中的应用及现状要点.pptxVIP

分子标记技术及其在凡纳滨对虾遗 传多样性研究中的应用及研究现状 以微卫星标记为主 2015.05.27 又称南美白对虾 节肢动物门、甲壳纲、十足目、 游泳亚目、对虾科、滨对虾属 1. 凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei） 原产于中南美洲，1988年由美国夏威夷引进我国。在相继攻克了集约化养殖和全人工繁育技术后已在我国形成规模化养殖，是目前世界上三大养殖对虾中产量最高的。 生长快、适应性强、壳薄体肥、肉质鲜嫩、营养丰富、易于运输。 2. 我国凡纳滨对虾养殖现状 （1）种质困境 ① 国内每年苗种需求量大，但因其为引进种，种质受美国等的垄断，种质引进耗资大； ② 养殖过程中不合理的养殖方式、多次近亲交配等造成种质退化。 （2）疾病盛行 ① 对虾白斑综合症病毒（WSSV），肝胰腺细小病毒病（HPV），桃拉综合征病毒病 （TSV），传染性皮下及造血组织坏死病（IHHNV）； ② 由噬水性气单胞菌、副溶血弧菌等引起的红体病，烂眼病、烂尾病等。 1 产量高 2 我国凡纳滨对虾遗传育种研究现状 ① 采用遗传多样性丰富的基础群体培育适合我国水产养殖环境的新品种； ② 利用遗传改良选育优质、高产、抗病抗逆的品种。 常用方法： “家系构建 + 家系内个体选择” 通过建立大量家系，并对不同家系进行性状测试和选择，达到选育目的。 3. 凡纳滨对虾遗传选育常用方法、问题及解决办法 存在问题： 成本高、工作量大、周期长、效率低，对复杂性状选择效率差。 解决方法： 在传统选育基础上，利用分子标记辅助育种。 分子标记 能反映生物个体or种群间基因组中某些差异特征的DNA片段，是DNA水平遗传多态性的直接反应。 分子标记的特点： a. 在生物体各组织均能检测到，不受季节和环境限制； b. 数量多，遍布整个基因组； c. 多态性高，无需专门创造特殊的遗传材料； d. 表现为中性，不影响目的性状的表达； e. 多为共显性，可区分纯合子和杂合子。 4. 分子标记及其在凡纳滨对虾育种中的应用进展 分子标记在虾类等甲壳动物研究中的独特优势 线粒体DNA（mtDNA）、随机扩增多态性（RAPD）、限制性片段长度多态性（RFLP）、扩增片段长度多态性（AFLP）、微卫星（SSR）、表达序列标签（ESTs）、单核苷酸多态性（SNP）等。 即线粒体中的遗传物质，其分子量小（15.7~19.5kb）、结构稳定、单（母）系遗传、不存在重组现象。 通过对mtDNA全序列或部分基因进行测定和分析来探讨物种进化关系。其中关于12sRNA、16sRNA和COI等基因片段的研究较多。 （1）线粒体DNA(mtDNA) Palumbi等通过对mtDNA的12S部分序列和COI基因扩增和测序，发现形态上相似的凡纳滨对虾和细角滨对虾在分子水平上其实存在着显著的差异。 原理 用人工合成的随机寡聚核苷酸为引物对待分析个体的基因组DNA进行PCR扩增。因不同个体基因组DNA序列之间存在差异，引物结合的位点就会位于不同的区段，因而扩增产物的大小和数量就会有差别，进而表现出多态性。 优点：所需DNA量少、无需预先知道模板DNA的序列组成； 缺点：可重复性差、无法区分纯合子与杂合子。 常用于种群生物学研究 （2）随机扩增多态性DNA(RAPD) 1）家系鉴定 早些时候，Garcia等人利用RAPD技术对培育的凡纳滨对虾家系进行研究，结果不同家系呈现不同的电泳图谱，因而认为RAPD标记作为凡纳滨对虾家系培育过程中不同家系鉴别的分子标记的潜力很大，有利于加快凡纳滨对虾纯系的建立。 2）遗传多样性分析 在中国，张海琪等利用RAPD技术对2个凡纳滨对虾养殖群体的遗传多样性进行了分析，结果表明浙江省养殖的SPF南美白对虾子一代遗传多样性水平低于普通的南美白对虾。 RAPD应用举例 突变会使酶切位点缺失or增加，从而产生数目/长度不等的DNA片段 （3）限制性片段长度多态性(RFLP) 电泳后虽按片段长度分开，但实际上仍是形成连续一片带 为将多肽片段检测出来，需将DNA变性，然后通过Southern杂交进行鉴别 优点：共显性遗传，可区分纯合子与杂合子，覆盖范围广， 稳定性好； 缺点：样品用量大且对纯度要求高，操作繁琐、工作量大、 成本较高。 1）群体遗传差异分析 李峰等人用Hinf I、Sty I和Taq I这3种酶