实验1-大肠杆菌的培养与分离30494幻灯片.pptVIP

生物工程发展史 1、传统生物技术 如酿酒、制作酸奶、污水处理、垃圾处理 2、现代生物技术 利用大肠杆菌生产胰岛素、生长激素、促红细胞生成素等药品。 现代生物工程包括: 基因工程：剔除或改变有害基因，引入正确基因或有利基因。 一、基础知识： (一)微生物 细菌的外形与大小 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落的形态是鉴定菌种的重要依据。 试验一 大肠杆菌的培养和分离 超净工作台 分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。 （四）大肠杆菌的划线分离 注意事项: 1、接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。 2、划线首尾不能相接。 3、划线后，培养皿倒置培养12~24h。 1、划线分离法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上. 划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？ 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 （五）大肠杆菌分离后保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法。 1、如何操作才可以尽量避免被杂菌污染? (1)胆大心细，操作快捷。 （2）注意灭菌操作原则，灭菌彻底，降低环境污染概率。 （3）注意微生物生长条件，如PH、渗透压、温度等。细菌喜碱，喜蛋白质，喜37°C；霉菌喜酸，喜糖，喜25-30°C。 课后习题： 2、在培养后如何判断是否有杂菌污染? （1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （2）显微镜观察其形态、大小。看是否有菌丝、孢子、芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。 （3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。 3、进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置? 恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放，则水分形成的水滴会落入培养基表面并扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则会导致菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分离目的。 4、实验完成后，接种过细菌的器皿应如何处理? 所有接触过菌的器皿都要先高压灭菌后再洗涤（特别是培养基）；使用后的废弃物也要高压灭菌后再抛弃。 5、如果分离的是转基因的大肠杆菌，如何保证不被普通的大肠杆菌所污染? 转基因用的质粒不是细菌中原有的，而是经过改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相应抗生素的培养基对菌体进行培养。 【课堂练习】 例1．关微生物营养物质的叙述中，正确的是（ ） A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 D * * 生物技术概述 生物技术也叫生物工程,是应用自然科学及工程学的原理,以微生物、动物、植物作为反应器,将物料进行加工,以提供产品为社会服务的技术。 例如：以酵母为反应器制酒、以醋杆菌为反应器制醋、以转基因的大肠杆菌为反应器生产生长激素、以羊为反应器生产人乳。 细胞工程、 发酵工程、 酶工程、 蛋白质工程、 基因工程 第一部分 :微生物的应用 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构. 微生物 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物 原生生物 真菌 ：是