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酵母菌液态深层通风发酵.ppt
酵母菌液态深层通风发酵 一、实验目的 了解通风搅拌罐的发酵过程 学习发酵过程各生理指标的测定 二、实验器材 1分光光度计 2发酵罐 三、试剂 （1）1% 3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：酒石酸钾钠100 g溶于400 mL蒸馏水，加热中依次加入NaOH 5 g，3，5-二硝基水杨酸5 g，苯酚1 g，亚硫酸钠0.25 g，搅拌至溶。冷却后定容至500 mL，储于棕色瓶室温保存。 （2）10%蔗糖溶液 （3）NaOH 1mol/l （4）乙酸缓冲液(0.05mol/ml) pH5.0 发酵罐倒入3.0L的如下成分的培养基： 发酵培养基： 蔗糖 20.0g/L 蛋白胨 5.0 g/L Na2HPO4 4.0 g/L MgSO4 0.5 g/L KH2PO4 1.0 g/L pH 4.5~5.5 四、检测 1在发酵过程中有pH电极、溶氧电极在线记录发酵情况； 2发酵前后通过取样在660nm下检测发酵液中细菌浓度的变化； 3总糖测定: 总糖标准曲线制作： 显色液制备： 将50ml 浓硫酸缓缓加入10ml 水中冷却至室温，加入0.6g 苯酚晶体搅拌使其溶解配成显色液。 标准葡萄糖溶液制备： 各配置0.1 mg/ml、0.15 mg/ml、0.2 mg/ml、0.25 mg/ml、0.3 mg/ml葡萄糖溶液。 各取上述葡萄糖浓度溶液1ml，分别加5.00ml 显色液，震荡混匀。置于沸水浴中保温30 ～35min，取出，放在冷水浴中，冷却至室温。与4 9 0 n m 处测定其吸光度值，将OD值为纵坐标与葡萄糖浓度为横坐标做图。 样品测定： 取1.00ml 的待测样品于试管中，加入5.00ml 显色液，震荡混匀。置于沸水浴中保温30 ～35min，取出，放在冷水+浴中，冷却至室温。与4 9 0 n m 处测定其吸光度值。所测得的OD值回归上述标准曲线，计算得出发酵液总糖含量。 4蔗糖酶产量测定 收集发酵液，离心，收集细胞，经过醋酸缓冲液两次洗涤，超声波破碎。离心收集上清液。 * *
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