分子光谱2011.ppt

1.? 谱带位移 2.? 吸收峰强度变化 常规吸收光谱实验要点 荧光分析法与紫外-可见分光光度法的主要区别 长共轭结构 F 450 320 640 360 720 320 nm—瑞利散射光 360 nm—水溶剂的拉曼光 640 nm，720 nm分别是二级的瑞利散射光和拉曼光 0.04μg奎宁/ml0.1N H2SO4 λex ＝320 nm Rayleigh Scattering 强度与r6/ ?4成正比 不能通过减空白来消除 选择合适的激发波长 从比激发波长大(10nm)处开始扫谱 减少带宽 拉曼光没有确定的波长，但它的频率和激发光的频率却有一定的差值。 例：在不同汞射线照射下水的拉曼光的波长 λex(nm) 248 313 365 405 436 水（Q） 271 350 416 469 511 硫酸奎宁在不同激发波长下的荧光(a)与拉曼光谱(b) 测定方法 两种不同的发荧光分子，一个为D，另一个为A 。当D吸收激发光，使D处于激发态D*。这时如果在附近存在A，D*的激发能传给附近的A，使A处于激发态A*, A* 就会发荧光 (荧光） 这一现象称为激发能量转移或荧光共振能量转移。D为供能者（donor , D),A为受能者（acceptor, A),A发出的荧光称敏化荧光。 FRET产生的条件 （1）D、A都能发荧光； （2）D的发射光谱和A的激发（或吸收）光谱必须有部分重叠； （3）D和A之间的距离必须小于10nm。 稳态荧光光谱 时间分辨荧光光谱 荧光分析仪器的主要部件 荧光和磷光的主要区别 求学问 需学问  只学答 非学问 —李政道 Adv.Funct.Mater. 2010,20, 1903-1909 0.65ppb(10-10 M) Overview of the FPassay. (A) Direct binding of fuorescent CoA FP probe to Sfp results in a large polarization .(B) Displacement of FP probe 4 from Sfp by ligand(I).ion with polarized light results in decreased polarization when compared with Sfp-bound probe.(C) Structure of FP ligand 4. 黑素皮质素受体4 3.荧光共振能量转移 Fluorescence resonance energy transfer, FRET A/Q Fluor A λ2 λ1 Absorbance emission A/Q λ (nm) Fluor B λ2 λ3 Absorbance emission Fluorescence resonance energy transfer (FRET) FRET应用---分子信标技术 无靶标存在下，茎环结构使得荧光基团和猝灭基团相互靠近，发生荧光共振能量（FRET）转移，荧光猝灭，荧光背景极低。 加入靶序列后，分子信标与完全互补靶序列形成刚性并且更加稳定的双链杂交体，使得荧光基团和猝灭基团距离增大，阻止了FRET的发生，荧光恢复。 有病毒RNA合成的细胞 无病毒RNA合成的细胞 荧光寿命 荧光寿命是当除去激发光源后，分子的荧光强度降低到最大荧光强度的1/e所需的时间，常用 τf 表示。 4. 时间分辨荧光分析(time-resolved fluorometry