聚醚类抗生素盐霉素的高效毛细管-中山大学化学与化学工程学院.docVIP

聚醚类抗生素盐霉素的高效毛细管 电泳—电导分离检测 罗 洁 谢天尧* 中山大学 化学与化学工程学院，广州 510275 摘要：本实验在熔融石英毛细管（50μm×50μm）中，以12 mmol /LTris（三羟甲基氨基甲烷）+1mmol/L醋酸+0.2mmol/L柠檬酸为电泳运行介质，分离电压12.0 kV，采用毛细管电泳/电导检测法在5min内实现了盐霉素的分离检测。讨论了缓冲体系的种类，缓冲体系中各组分的浓度，进样样品的制备，进样方式和分离电压对检测结果的影响。线性检测范围为5～100 mg/L（相当于6.5×10-6 mol/L~1.3×10-4 mol/L）。检测限为1 mg/L。对盐霉素饲料添加剂含量进行测定，回收率为93.0%～100.1%。方法高效快速简便，结果令人满意。 关键词：毛细管电泳，电导检测，盐霉素 1. 前言 盐霉素（salinomycin）又名沙利霉素、萨里诺马辛、球虫粉、优素、AHR3096。分子式为C42H70O11。在实际应用中，常用其钠盐，即盐霉素钠，分子式为C42H69O11Na,分子量为772.99。结构式比较复杂，可示意为： 盐霉素钠是一种白色或浅棕色无定形粉末，无味，在pH4到pH10之间微溶于水，易溶于低级醇、丙酮、氯仿、苯、乙醚、石油醚、醋酸乙酯、四氯化碳、正己烷等，在中性或碱性环境中稳定，在高温120℃时亦不失活，游离酸稳定性较差。在酸性介质中易失活[31]。 盐霉素属于聚醚类抗生素，同时也为典型的离子载体抗生素，其环状结构使其能强烈地与细胞中的阳离子紧密结合，以致能改变和加大细胞膜上脂质屏障的渗透性，从而抑制了胞子体和裂殖体正常的离子平衡，终致杀死球虫。盐霉素首先由日本株式会社东京研究所于1968年由白色链霉菌株分离、培养、发酵制得，具有广泛得抗菌谱，主要对葛兰氏阳性菌、真菌、病毒及疟原虫有很高的抑菌活性。国内外广泛用来防治牛、羊、鸡、兔的球虫病；同时可作为饲料添加剂使用，促进畜禽生长发育和提高饲料利用率。但是聚醚类抗生素使用剂量的安全范围较窄，盐霉素对肉鸡的ＬＤ５０为１５０毫克／千克体重。其在饲料中的含量稍大即可使动物的增重减慢，饲料转化率降低。 目前，已报道的对盐霉素的测定方法有高效液相色谱柱后衍生化法[32]，高效液相色谱柱前衍生化法[33]和分光光度法[34]。本文报道采用毛细管电泳—电导检测法（CE—CD），以12mmol/L tris（三羟甲基氨基甲烷）+1mmol/L醋酸+0.2mmol/L柠檬酸为电泳运行介质，分离电压12.0 kV，采用毛细管电泳/电导检测法在5min内实现了盐霉素的分离检测，应用在盐霉素饲料添加剂中盐霉素含量的测定，取得较满意结果。 2. 实验部分 2.1 仪器和试剂 CES2003 毛细管电泳仪（高压电源，电导检测器，毛细管电泳数据工作站，中山大学化学与化学工程学院研制）；石英毛细管（50μm×50μm i.d. 河北永年光导纤维厂）；CQ-2B型超声波清洗器（明珠电器有限公司） 三羟甲基氨基甲烷（Tris）、醋酸、柠檬酸（Cit）、硼酸、醋酸钠、甲醇、乙醚。盐霉素标准品（中国兽医药品监察所） 所用试剂均为分析纯；水为二次去离子石英重蒸水 2.2 缓冲溶液和样品溶液的配制 Tris和Cit各配成0.1 mol/L溶液；醋酸配成0.2 mol/L溶液备用。实验时，按比例各取适量以配成不同浓度电泳运行缓冲液。盐霉素标准品配成300 mg/L储备液。 2.3样品提取 方法一：准确称取0.15 g盐霉素饲料添加剂，倒入样品瓶中，加入5.00 ml 1：1甲醇水溶液，密封，超声10分钟后，取上层清液于4000 r/min离心机离心10分钟，移取0.300ml上层清液到进样瓶中进行进样。 方法二：称取约2 g盐霉素饲料添加剂研磨10分钟，准确称取研磨后的添加剂0.15 g，倒入样品瓶中，加入5.00 ml 乙醚，密封，超声10分钟后，移取0.300 ml上层清液到进样瓶中，在60℃水浴中将乙醚全部挥发，再加入0.300ml 1：1甲醇水溶液，超声5分钟后进样。 方法三：准确称取上述研磨后的添加剂0.15 g，倒入样品瓶中，加入5.00 ml 乙醚，密封，超声10分钟并放置24小时后，移取0.300 ml上层清液到进样瓶中，在60℃水浴中将乙醚全部挥发，再加入0.300ml 1：1甲醇水溶液，超声5分钟后进样。 方法四：称取约2 g盐霉素饲料添加剂研磨30分钟，准确称取研磨后的添加剂0.15 g，倒入样品瓶中，加入2.50 ml 乙醚，密封，超声10分钟后，移取0.150 ml上层清液到进样瓶中，剩余的乙醚全部移出，再加入2.50 ml 乙醚，密封，超声10分钟，再次移取0.150 ml上层清液到进样瓶中，