RP―HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量.docVIP

RP―HPLC测定夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量 　　[摘要] 目的 建立夏桑菊颗粒中主要成分迷迭香酸的含量测定方法。 方法 采用高效液相色谱法对迷迭香酸进行含量测定，色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流速：0.8 ml/min，检测波长329 nm，柱温27℃，进样体积10 μl，流动相为甲醇-0.5%乙酸水系统梯度洗脱。 结果 含量测定中迷迭香酸进样在0.22～8.80 μg范围内，线性关系良好（r=0.9999），平均回收率和RSD均符合要求。 结论 所建立方法操作简单、专属性和重现性良好，可作为该制剂的质量控制方法之一。 　　[关键词] 夏桑菊颗粒；迷迭香酸；高效液相色谱法 　　[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）07（b）-0008-03 　　夏桑菊颗粒是由夏枯草、桑叶、野菊花3味药材组成，具有清热解毒、清肝明目之功效，临床常用于风热感冒、目赤头痛、高血药等症，并可作为清凉饮料使用，商品规格20袋/包，10g/袋。夏桑菊颗粒收载于原卫生部标准（部颁标准）第15册，缺乏含量测定项[1]。夏桑菊颗粒的君药是夏枯草，2010年版《中国药典》修订了夏枯草的含量测定项，其含量测定指标修订为迷迭香酸[2]。迷迭香酸具有抗菌[3-5]、抗病毒[4]、抗氧化[6-7]、抗血栓[4，8]、保肝护肝[9]、抗炎活性[4，10-11]和免疫抑制活性[4]等作用。因此，本研究采用HPLC方法对夏桑菊颗粒中主要活性成分迷迭香酸的进行含量测定研究，为提高夏桑菊颗粒的质量控制标准提供依据。 　　1 仪器与试剂 　　1.1 仪器 　　BPZ11D型电子分析天平（Sartorius公司）；KQ-100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；Waters 2695-2996高效液相色谱系统，Empower工作站，含自动进样器、四元梯度泵（美国，Waters公司）。 　　1.2 溶剂与试药 　　甲醇（色谱纯，TEDIA公司），水为哇哈哈纯净水；乙酸（分析纯，北京化工厂）。对照品迷迭香酸[12-13]（外标一点法测定纯度98%）和样品夏桑菊颗粒及阴性制剂颗粒[14]，由湖南中医药大学药学院林丽美教授赠送，具体样品见含量测定项。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　选择Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）为色谱柱；检测波长：329 nm；流速：0.8 ml/min；样品室温度：20℃；柱温：27℃；进样体积：10 μl；流动相：甲醇（A）-0.5%乙酸水（B）梯度洗脱，0→60 min，30%A→40%。按照上述色谱条件，迷迭香酸分离很好，无干扰，得色谱图1。 　　2.2 供试品溶液制备 　　称取夏桑菊颗粒、缺夏枯草的阴性制剂颗粒样品约5 g，精密称定，加甲醇10 ml，称重，超声（功率250 W，频率40 kHz）30 min，取出，静置放凉，甲醇补重，0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液进行HPLC分析。 　　2.3 标准曲线的绘制 　　精密称取对照品迷迭香酸适量，用甲醇溶解，定容得浓度为0.22 μg/μl的对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液1、2、3、5、10、15、20、25、30、40 μl进样分析，记录色谱条件下测得的峰面积。以峰面积作为纵坐标（Y），进样量（μg）作为横坐标（X），得回归方程：Y=4 541 216X-411 008（r=0.9999）；线性范围：0.22～8.80 μg。 　　2.4 精密度试验 　　取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176），按照“2.2”项制备供试品溶液，分别精密吸取溶液10 μl，连续进样6次，按上述色谱条件测得迷迭香酸峰面积，其RSD=0.58%。 　　2.5 稳定性试验 　　取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176），按照“2.2”项制备供试品溶液，精密吸取溶液10 μl，分别在2、4、6、8、10、12、24 h进样，按上述色谱条件测定迷迭香酸的峰面积，其RSD=0.58%。 　　2.6 重复性试验 　　取夏桑菊颗粒同一供试品（批号：FA10176）6份，精密称定，按照“2.2”项下制备供试品溶液，精密吸取每份溶液10 μl，按上述色谱条件测得迷迭香酸峰面积，其RSD=0.60%。 　　2.7 加样回收率试验 　　取同一批已知准确含量的夏桑菊颗粒样品（批号：FA10176）约2.5 g，精密称定，分别精密加入一定量的对照品迷迭香酸溶液，按“2.2”项制成加样的供试品溶液，按上述色谱条件测定迷迭香酸总量，计算加样回收率（表1）。 　　2.8 含量测定 　　按