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不同加样方式对抗―HCV―ELISA检测结果的影响 　　【摘要】　目的　探讨不同加样方式对抗HCV检测结果的影响。方法　采用加样时混合与未混合两种方式对抗HCV阴性标本及0.5NCU/ml的弱阳性质控品进行检测，观察检测结果的差异。　结果　不同加样方式对阴性检测结果无影响，而对弱阳性质控品检测结果差异显著。　结论　采用加样混合方式检测抗HCV更有利于弱阳性标本的检出。 　　【关键词】　加样方式；抗HCV；结果影响 　　目前国内血站检测抗HCV的方法，多为间接ELISA法。间接ELISA检测献血者血浆的加样量仅10　μl，加样量非常小，这就要求我们的加样系统必须十分精确，以保证检测结果的准确性。在实际工作中，我们多采用自动化设备来检测，而自动化仪器加样的方式也可以分为两种，一种是直接将标本加注到HCV稀释液中，另一种是将标本加注到稀释液后，再采用反复吸打的方式进行混合，笔者发现采用不同的加样方式，对检测抗HCV的结果有着较大的影响，现报告如下。 　　1　材料与方法 　　1.1　材料　阴性标本：经本站两家试剂检测的抗HCV阴性献血者标本。弱阳性标本：采用抗HCV质控品（0.5NCU/ml），北京康彻思坦公司，批号：201105003。 　　ELISA抗HCV试剂：厦门新创试剂，批号：2011115824。 　　1.2　仪器　全自动酶免分析系统：AT　PLUS2、FAME24/20　瑞士哈米尔顿公司。 　　1.3　方法　采用同一厂商试剂，采用不同的加样方式进行加样，在同一台FAME后处理中进行检测。 　　加样方式：混合方式：吸取10　μl标本，加入相应的酶标孔HCV稀释液中，并反复吸打一次。每板加40份阴性标本和40份弱阳性标本。未混合方式：吸取10　μl标本，直接加入相应的酶标孔HCV稀释液中。每板加40份阴性标本和40份弱阳性标本。 　　1.4　统计学方法　产生数据采用SPSS　17.0统计分析，配对资料采用t检验，P0.05为差异，有统计学意义。 　　2　结果 　　不同加样方式检测结果比较，见表1 　　3　讨论 　　两种加样方式中，对于确定为阴性的标本，结果并无影响（P0.05），但对于弱阳性标本，本文中主要以0.5NCU/ml的质控品代替弱阳性标本进行试验，结果差异显著（P0.01）。这种差异的出现，笔者认为可能原因如下：①混合加样方式，使标本在稀释液中得到充分混合，减少了标本在稀释液中自由扩散达到混匀的时间。②加样过程中，处理器加样针尖处可能由于液体的表面张力的作用而存在液滴，在不采用混合加样模式下，该存留的液滴将使相对加样误差达到0.4%以上［1］。由于血浆与水具有不同的粘滞系数，所以在加入血浆等粘滞系数较大的液体时，这种误差会更加明显，正是这种误差造成了检测结果的差异。经笔者深入试验发现，如果采用未混合加样方式，加样量12　μl约可达到混合加样方式检测结果的S/CO值。 　　有学者的研究结果表明，血站筛检献血者血液时，应将抗HCV　ELISA的阳性判断值下限20%，即0.8，这对于减少HCV的经输血传播有重要意义［2］。也就是说，对于ELISA检测接近cutoff值的，会有“灰区”标本的存在。对于这种标本，如采用未混合加样方式检测抗HCV，很可能会判断为阴性，而采用混合加样方式则有可能检出。所以对于弱阳性标本，尤其是灰区标本来讲，混合加样方式会比未混合加样方式增加检出率。 　　对于ELISA检测实验中试剂的平衡时间、温度、洗板等原因对检测结果的影响，多见诸文献报导［3］，但对于加样方式对间接ELISA法检测抗HCV结果的影响未见深入探讨。 　　HCV主要经血液途径传播，PTH　90%是HCV［4］。抗HCV的检测已成为重要的防止HCV经输血传播的手段之一。　目前国内血站系统检测抗HCV多为第三代ELISA间接法试剂，该种试剂采用样本量10　μl加入到100　μl样本稀释液中，加入样本量较小。建议如有可能，在抗HCV检测过程中，应采用加入标本后并进行混合的加样方式，以增加弱阳性标本的检出。 　　参　考　文　献 　　［1］　李金明.临床酶免疫测定技术.北京：人民军医出版社，2006：140. 　　［2］　邓巍，王露楠，李金明.丙型肝炎病毒抗体酶联免疫吸附试验阳性判断值在献血员血液筛检中的意义.中华检验医学杂志，2004，27（10）：664. 　　［3］　闵志军，张力超，张建伟，等.试剂盒平衡时间对抗HCV检测结果的影响因素分析.临床血液学杂志，2010，23（12）：713715. 　　［4］　马现君，陈元锋，楚中华，等.无偿献血者不同人群抗HCV流行情况调查研究.临床血液学杂志，2008，21（4）：195196. 4