乳腺导管内乳头状肿瘤免疫学特征分析.docVIP

乳腺导管内乳头状肿瘤免疫学特征分析 　　【摘 要】目的：观测乳腺导管内乳头状肿瘤（ intraductal papillary neoplasms， IDPN）的免疫特征，并且探讨分析其的诊断方法。方法：根据世界卫生组织分类等相关准则，挑选出乳腺导管内乳头状肿瘤的患者50位，对病人的组织进行切片，并对切片进行免疫组化染色和HE染色，选用的一抗有CK5、SMA、p63、CD10、CK34βE12。通过光镜下的观测得出实验结果。结果：CK5、SMA 在IDPN 基侧细胞/肌上皮的表达水平有明显的差别（χ2=12.573， P≤0.05），SMA 相比于CK5较强；SMA 、CK34βE12在 IDPN 的基侧细胞/肌上皮的表达水平有显著的差异（χ2=25.793， P≤0.05），CK34βE12 相比于SMA较弱。结论：IDPN是一组良性恶性程度不同的病变，HE染色的形态和免疫组化染色都有差异，所以诊断IDPN时应采用HE染色和免疫组化染色相结合标准进行诊断。 　　【关键词】乳腺肿瘤；导管内乳头状肿瘤；免疫组织化学 　　世界卫生组织将 IDPN作为了一种单独的疾病列出[1]，并将其认定为产生在乳腺的导管中的、由上皮增殖的覆盖着的纤维--脉管为轴心产成的乳头状样的病变，可以有（或）无肌上皮层。总括为下面几个类型：导管内的乳头状癌、非典型、中央型、周围型、囊内乳头状。IDPN是比较罕见的乳腺肿瘤，现在IDPN在类型分类和命名上以及良性恶性的判断标准方面有一定的分歧[2] [3]。因此，本实验对50例IDPN患者进行研究，以探讨其诊断标准，并且分析其诊断的方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　依据世界卫生组织乳腺肿瘤组织学分类（ 2003）等分类标准，本课题组从首都医科大学附属友谊医院的病理科的档案中选出符合乳腺IDPN的病人50位。病人的组织都由百分之十的甲醛（中性）固定备用，用常规的石蜡包埋，用于切片。 　　1.2 方法 　　蜡块3～5μm连续切片，进行HE染色和免疫组织化学法染色。选用CK5（细胞角蛋白-5）、SMA（肌动蛋白）、p63（肿瘤抑制基因）、CD10（普通急性淋巴母细胞性白血病抗原）、CK34βE12（肌动蛋白）作为一抗，一抗购自中山金桥生物技术有限公司。运用SP三步法法进行染色。将片子脱蜡到水化，用PBS浸洗，置于柠檬酸的缓冲液中，放入微波炉对组织的抗原进修复，自然条件下逐渐冷却至三十到四十℃。用tri-ton浸泡，用百分之十的双氧水在室温灭活10 分钟，滴加相应的抗体（适宜的浓度），在冰箱4条件下孵育过一夜。第二天拿出在37℃的条件下恢复温度（1小时），加二抗等相关的试剂。用DAB或其他显色剂显色，从脱水到用中性树胶封片，在光学显微镜下进行观察。并用NIS-Elements BR 3.2软件测定积分光密度值及阳性细胞数，进行统计学分析。细胞被DAB染成黄棕色的为阳性反应，显色时间在镜下观察确定。依据被染色的细胞数量和染色的强度两个指标判断阳性等级。按染色的显色的强弱分成：棕色、棕黄色、黄色、无色。依次规定计分为3、2、1、0；依据阳性的细胞数量占同种细胞的比分成： 0、小于1/3、1/3到2/3之间、大于2/3， 分别计分为0、1、2、3。将两种指标的计分相加得和，确定总和为0分是阴性、总和是2分的为弱的程度的阳性、3到4分之间的为适中程度的阳性、5到6分的为强阳性。 　　1.3 统计学方法 　　本实验以 SPSS11.5 软件进行统计分析，采用χ2检验和 Ridit 分析，P≤0.05 为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　50例IDPN中，只有IDPoma出现的患者25例，另外2例伴有AIDPoma、5例伴有IDPC和AIDPoma、一位患者伴有IDPC；有AIDPoma的患者5位，其中伴随ID-Poma的有2位，伴有IDPoma的有1位，伴有IDPC的有1位；IDPC的患者21例，其在这之中有4位患者分别伴有AIDPoma和（或） IDPoma。20例患者因为肿瘤发生在大导管内、且周围能看见大导管无法充分伸展的TDLU，从而将病人确定为中央型；周围型的乳头样瘤大多产生于在TDLU，发生的部位多在乳腺的周围，常常与其他病变一起产生，12 例患者的肿瘤在TDLU 里产生、周围存在比较多的能够充分伸展的 TDLU ，从而确定为而周围型；另外14 例患者既出现了大导管又能看见见有充分伸展的 TDLU，从而定义为亚节段导管与小叶外的终末的导管接合的部分。有5例患者因为出现的乳头状瘤个数多余或等于3个，从而将他们确诊为多发性。病变的HE染色后的形态、免疫组化的表达及诊断的标准均一样，所以，下面按照病例的主要诊断的成分加以叙述。 　　2. 1 临床表现 　　符合标准分类标