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人类FOXL2基因突变谱的系统性研究 　　【摘要】 目的：通过对人类FOXL2基因突变谱研究，确定FOXL2基因突变分型及其与小睑裂综合征的相关性。方法：收集所有的突变，并对这些突变进行统计学处理并分类，进行蛋白表达谱分析，各功能区分析以及患者的临床特征与突变相关性分析。结果：根据分析，将FOXL2基因突变分为10型，各分型与小睑裂综合征患者的临床特征关系各不相同。单纯性卵巢功能早衰患者及单纯性上睑下垂患者与FOXL2基因突变无密切相关性。结论：FOXL2的突变与BPES发病密切相关，多聚丙氨酸区域的丧失与Ⅰ型BPES密切相关。FOXL2的突变与单纯性POF及上睑下垂的发病关系并不密切。 　　【关键词】 小睑裂综合征； FOXL2； 卵巢功能早衰； 突变 　　FOXL2基因是一个2.7 kb的单外显子基因，编码376个氨基酸，预期的蛋白质属于翼状螺旋/叉头型转录因子调节家族，包含一个特有的101个氨基酸的forkhead DNA结构域和一个与此分离但功能尚未阐明的多聚丙氨酸肽段。小睑裂综合征（BPES）是表现为睑裂狭小、上睑下垂和倒转型内眦赘皮等一系列症状的常染色体显性遗传病。临床上分为两型：Ⅰ型：女性患者不育，原发闭经或提前绝经、小子宫和卵巢功能早衰；Ⅱ型：男女患者均可生育。目前研究证实FOXL2基因与BPES的发病密切相关，是首选致病基因。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 参考The human FOXL2 mutation database（http：//medgen.ugent.be/foxl2/）[1]，搜集所有报道过的突变，共发现有144个变异位点，其中包括15个单核苷酸多态位点。对这些突变进行统计学处理并分类，同时进行蛋白表达谱分析，各功能区分析，以及患者的临床特征与突变相关性分析。 　　1.2 突变位点的研究方法 （1）直接测序；（2）多重性连接依赖的探针扩增法；（3）微卫星位点分析和单核苷酸多态性分析；（4）荧光原位杂交技术分析。 　　1.3 前期实验结果的分析 笔者对一期收集到的29例BPES患者血样进行FOXL2基因突变研究，并将前期实验中所得的突变结果进行分析归类[2-3]。 　　2 结果 　　2.1 FOXL2的功能区 FOXL2的功能区包括forkhead DNA结合域（第52～152残基区域）、功能尚未阐明的多聚丙氨酸肽段（221～234位氨基酸残基区）以及转录激活区（第280～320残基区域）。 　　2.2 分类结果 突变谱共分10型，具体分型如下：A：蛋白截短，无forkhead DNA结合域及其后的所有氨基酸；B：蛋白截短，包含部分forkhead DNA结合域；C：蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域，无多聚丙氨酸肽段及转录激活区；D：蛋白截短，包含完整forkhead DNA结合域和完整的多聚丙氨酸肽段，无转录激活区；E：转录激活区域突变，蛋白截短或延长，包含完整forkhead DNA结合域和完整的多聚丙氨酸肽段；F：转录激活区后的突变，蛋白截短或延长，包含完整forkhead DNA结合域、多聚丙氨酸肽段及转录激活区；G：多聚丙氨酸肽段框架内移码突变，蛋白延长或截短；H：只有错义突变，单个碱基的替换或颠换；I：包括微缺失及FOXL2基因与其他基因的染色体重排；J：其他突变，包括5′-UTR和3′-UTR区域变异。 　　2.3 患者的临床特征与突变相关性分析结果 所有发现突变的患者均为典型的BPES，两型BPES存在着基因型和表现型的相互关联。同一个突变可导致明显的家系内和家系间的表型多样性，即表现型和基因型的多样性。 　　A组突变由于forkhead区域的破坏致DNA结合能力的下降，从而导致FOXL2的单型缺陷；由于缺乏相关的信息，对B组不能作出相关性判断；C组，蛋白截短，无多聚丙氨酸肽段及多聚脯氨酸肽段，发生POF几率非常高，多为BPESⅠ型；D组，具有完整的forkhead和聚丙氨酸区域，蛋白截短，家系内存在表现型的多样性；E组，具有完整的forkhead和聚丙氨酸区域，移码突变导致蛋白延长，导致Ⅰ型和Ⅱ型BPES；F组的基因型与表现型亦不能作出相关性判断；G组的多聚丙氨酸肽段突变框架移码突变，导致聚丙氨酸扩增，发生在Ⅱ型BPES家系和类型不明确的家系中。多聚丙氨酸肽段延长，导致聚丙氨酸扩增，多发生在Ⅱ型BPES家系；H组错义突变，由于病例数量少及缺乏相关的信息，不能作出判断；I组发生在散发的患者和家族性BPES，多伴发智力低下；J组未引起任何蛋白变异，由于病例数量少及缺乏相关的信息，不能作出相关性判断。 　　单纯的卵巢功能早衰（POF）患者中发现的FOXL2的变异均为单核苷酸多态性（SNP），笔者对30例单纯性上睑下垂患者的F