实时荧光定量PCR技术与应用.pptVIP

北京元业伯乐科技发展有限公司 PCR概念 定量PCR 实时荧光定量PCR三个关键词： 实时，荧光，定量 如何实时检测？？？ 借助荧光物质示踪扩增产物量的变化 荧光曲线 随着PCR反应的进行，扩增产物不断累积，荧光信号强度不断增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，得到一条荧光扩增曲线图 定量原理 如何对起始模板定量？ 通过Ct值和标准曲线实现对起始模板的定量分析 引入两个概念： 荧光阈值、Ct值 定量原理 Ct值的概念 为什么要用Ct值定量 阈值选择 阈值的选择 定量原理 理想的PCR反应： X=X0*2n 非理想的PCR反应： X=X0(1+Ex)n n：扩增反应的循环次数 X：第n次循环后的产物量 X0：初始模板量 Ex：扩增效率 Absolute（绝对定量） Determines input quantity of a nucleic acid target Requires a standard curve Relative（相对定量） Determines fold differences in input target nucleic acid quantities between samples Performed with or without a