抗血清制备及抗体效价测定.docx

摘要4【实验过程】4PartⅠ. NDV 抗血清制备4一、实验原理4二、实验仪器、材料和试剂51. 仪器52. 材料53. 试剂5三、方法和步骤5（一）NDV 兔抗血清制备51. 家兔捉拿方法52. 家兔固定方法53. 初次免疫64. 二次免疫65. 终末免疫66. 试血77. 颈动脉放血78. 血清分离79. 抗血清保存7（二）NDV 鼠抗血清制备81. 小白鼠的捉拿和固定82. 初次免疫83. 二次免疫94. 终末免疫95. 试血96．放血107．血清分离108．抗血清保存10Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价11一、基本原理11二、实验仪器、材料和试剂111. 仪器112. 材料113. 试剂11三、方法和步骤111. 灭活鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株抗原提取112. 1%琼脂糖配制113. 倒平板114. 打孔115. 稀释抗血清126. 加样127. 孵育128. 结果观察12Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价13一、基本原理13二、实验仪器、材料和试剂131. 仪器132. 材料133. 试剂13三、方法和步骤131. 鸡新城疫病毒 Ulster 2C 株灭活抗原提取132、抗原包被133. 封闭144. 洗板145. 稀释抗血清146. 加抗血清147. 洗板148. 加酶标二抗149. 洗板1410. 显色1411. 终止1412. 读数1413. 结果判定15Part Ⅳ. 免疫印迹实验鉴定抗体的特异性15一、基本原理15二、实验仪器、材料和试剂151. 仪器152. 材料153. 试剂15（1）SDS相关试剂：15（2）Western blotting 相关试剂：16三、方法和步骤161. SDS. 转膜173. 免疫检测17（1）膜的封闭17（2）洗膜17（3）加入一抗17（4）洗膜18（5）与二级抗体作用：18（6）洗膜18（7）Odessey 近红外成像仪扫描成像18【实验结果及分析】18 NDV 抗血清制备及抗体效价测定摘要：抗血清，新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C 株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。也叫免疫血清，是指含有免疫蛋白的血清。抗体效价指抗体的物理状态及其在体内滞留时间，以其与抗原反应的多少来表示其免疫效果。此次实验主要是进行家兔与小鼠的新城疫病毒抗血清的制备过程，并通过酶免疫吸附试验、兔疫印迹实验对其进行抗体效价检测。关键字：NDV 抗血清 抗体效价 免疫【实验过程】本次实验一共分为四个大步骤：PartⅠ. NDV 抗血清制备Part Ⅱ. 琼脂双扩散实验检测抗体效价Part Ⅲ. 酶联免疫吸附试验测定 NDV 抗血清效价Part Ⅳ. 免疫印迹实验鉴定抗体的特异性PartⅠ. NDV 抗血清制备一、实验原理将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应 B 细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体（Polyclonal antibody，PcAb）。多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。对于免疫原性较弱的可溶性抗原(如蛋白质类抗原)要加入佐剂，以增强免疫性。本实验介绍新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）抗血清的制备过程。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）又称亚洲鸡瘟病毒、伪鸡瘟病毒或禽肺脑炎病毒。在病毒分类学中的位置属于副黏病毒科（Paramyxoviridae）、副黏病毒属（Paramyxovirus）中的一个种。该病毒主要危害鸡、珠鸡和火鸡，在被侵袭的鸡群中迅速传播，强毒株可使鸡群全群毁灭。以新城疫病毒灭活疫苗（Ulster 2C 株）灭活油剂苗多种途径免疫兔和小白鼠，制备新城疫病毒抗血清。二、实验仪器、材料和试剂1. 仪器5mL 无菌冻存管，2.5mL 和 1mL 注射器，塑料静脉插管，碘酒，75％酒精棉球，剪刀，止