第九章酶的非水相催化课题.pptVIP

近20年来，发现10多种水解酶和氧化还原酶在有机溶剂中具有活性 * 水不互溶性有机溶剂通常是烷烃类、芳香族化合物、卤代烃、醚等。 * 相同的酶在不同的溶剂中表现出来的活性不同，表示有机溶剂的性质与酶活之间存在一定的关系。人们曾提出很多表达有机溶剂性质的参数，比如溶解度参数、介电常数、偶极矩等。直到1985年Lanne等人提出了极性参数来描述有机溶剂极性与酶活之间的关系。lgP的值越大，疏水性越强，lgP的值越小，亲水性越强 * N—Ac—L—PheOEt：N-乙酰-L-Phe乙酯 Klibanov在研究枯草杆菌蛋白酶催化的转酯化反应中，发现亲水性底物N—Ac—L—SerOEt在疏水性溶剂CH2C12中反应速度快，而疏水性底物N—Ac—L—PheOEt在亲水性溶剂叔丁醇或叔丁胺中反应速度快。 Enzymatic catalysis in Non-aqueous system酶在非水介质中进行的催化作用称为酶非水相催化 第六章 酶的非水相催化 有机介质中的酶催化是指酶在含有一定量水的有机溶剂中进行的催化反应。 适用于底物、产物两者或其中之一为疏水性物质的酶催化作用。 6.1.1 有机介质中的酶催化 6.1.2 气相介质中的酶催化 酶在气相介质中进行的催化反应。 适用于底物是气体或者能够转化为气体的物质的酶催化反应。 6.1.3 超临界流体介质中的酶催化 酶在超临界流体中进行的催化反应。 超临界流体是指温度和压力超过某物质超临界点的流体。 6.1.4 离子液介质中的酶催化 在离子液中进行的催化作用。 离子液（ionic liquids）是由有机阳离子与有机（无机）阴离子构成的，在室温条件下呈液态的低熔点盐类，挥发性低、稳定性好。 6.2 有机介质中水和有机溶剂对酶催化反应的影响 6.2.1 有机介质反应体系 （1）微水介质体系(含水量一般小于2%) 酶以冻干粉或固定化酶的形式悬浮于有机溶剂中，在悬浮状态下进行反应。 （4）胶束体系 （5）反胶束体系 反相胶束与生物膜有相似之处适用于生物膜表面或与膜结合的酶的结构、催化特性和动力学性质研究。（酶被限制在含水的微环境中，而底物和产物可以自由进出胶束）看图正、反胶束体系 “钢性”与”柔性”的动态平衡（维持酶催化活性 ） “紧密”：酶分子内的氢键 “开启”：酶分子间的氢键 a．不同酶需水量不同 b. 同一种酶在不同有机溶剂中需水量不同 溶剂疏水性越强，需水量越少 刚性：生物大分子结构的精确性 柔性：生物大分子局部区域具有一定的可运动性。 6.2.2 水对有机介质中酶催化的影响 生物催化剂 必需水层 （1）必需水（essential water）： 紧紧吸附在酶分子表面，维持酶催化活性所必需的最少量水。 （1） 与酶分子表面带电基团结合达到0-0.07g/g（水/酶）：一个酶分子周围有0-60个水分子，蛋白质自由度无，酶活无 （2） 与表面的极性基团结合(0.07-0.25g/g)：一个酶分子周围有60-220个水分子，蛋白质自由度上升，显示出酶活 （3） 凝聚到表面相互作用较弱的部位（0.25~0.38g/g）：一个酶分子周围有220-300个水分子，蛋白质自由度上升，最大酶活 （4） 酶分子表面完全水化，被一层水分子覆盖。：酶分子周围的水分子达到300以上，酶活降低，自由度最大 干燥的酶水合过程： 有机溶剂的极性 lgP —— 极性参数 P：溶剂在正辛烷与水两相中的分配系数 研究表明，有机溶剂的极性越强，越容易夺取酶分子结合水，对酶活力的影响就越大。 用有机溶剂极性参数lgP描述有机溶剂的极性与酶活力之间的关系 溶剂极性对酶活性影响的规律（Laane规律） lgP 性质 水中溶解度/% (20℃) 对酶活性的影响 ≤2 极性溶剂 ＞0.4 容易使酶失活，较少使用 ＞2，＜4 中等极性 0.04～0.4 酶的活性难以预测，小心使用。可以表现酶活 ≥4 非极性 ＜0.04 不会引起酶的变性，能保持酶的高活性 （1）有机溶剂对酶必需水的影响 极性弱的溶剂：影响小 极性强的溶剂：夺取酶必需水 疏水性溶剂：不易溶解吸附酶必需水 酶的失水与溶剂的极性参数（lgP）和介电常数（ε）相关，与系统中底物的极性、底物浓度和含水量均有关系 催化过程： S→E-S→E-P→P （水相反应） S→water shell→E-S→E-P→P→organic phase （非水介质） 主要推动力： 底物-酶之间的结合能 Organic Solvent E-S E-P 底物分子必须先进入酶分子的必需水层，再进入到酶活性中心完成催化过程，产物同样