第十二章基因表达调控课题.ppt

第十二章 基因表达调控 教学目的与要求： 了解：真核生物和原核生物基因表达调控的特点。 理解：真核生物基因表达调控方式。 掌握：原核生物基因表达调控的规律。 教学重点： 原核生物操纵子的正负调控及突变。 有乳糖没有葡萄糖 操纵子被诱导，基因表达 乳糖操纵的负调控 负调控系统(negative regulation system)：没有调节蛋白存在时基因表达，加入某种调节蛋白后基因活性就关闭的控制系统。 为什么葡萄糖不能诱导三种酶的产生？ 腺苷环化酶 ATP cAMP 乳糖操纵的正调控 正调控系统(negative regulation system)：没有调节蛋白存在时基因关闭，加入某种调节蛋白后基因活性就被开启的控制系统。 乳糖操纵子的正负调控的比较 条件 调节蛋白 基因活性 3） 乳糖操纵子的基因突变 lacI基因的突变 lacI基因的突变 LacI+ → LacI— ： 阻遏物不能结合在lacO 上，lac操纵子活动失控，有无乳糖，均有酶的产生，—组成型突变 LacI+ → LacIs ：阻遏物不能和乳糖结合，操纵子活动被抑制，有无乳糖均不产生酶—超阻遏突变 4）乳糖操纵子的基因突变 lacO基因的突变 LacO 基因的突变 LacO → LacOc 思考 操纵子的突变类型中，那些突变在有无乳糖存在的情况下均能表达三种酶？ LacI+ → LacI— LacO → LacOc 应用 X–Gal是β–半乳糖苷酶的底物，水解后呈蓝色。 用于鉴定目的基因是否插入载体。 应用 用于特异性表达目的基因。 色氨酸操纵子调控机制 培养基中有足够色氨酸 操纵子关闭 色氨酸合成停止 缺乏色氨酸 操纵子被打开 色氨酸合成开始 3） 应用 对色氨酸生物合成途径中的关键基因trpR进行改造。 敲除trpR基因解除基因组上色氨酸合成和转运关键酶受到的反馈阻遏调控，获得高产菌株. 思考 如何利用乳糖操纵子的突变类型，进行转基因动物的培育？ 请查阅相关资料列举操纵子的研究进展。 第二节 真核基因表达调控 1. DNA水平调控 DNA水平调控是通过改变基因组中有关基因的数量、结构顺序和活性而控制基因的表达 调控机制包括： 基因丢失 基因的扩增 重排 化学修饰 1）基因丢失 ：在个体发育过程中，某些原生动物、线虫、昆虫和甲壳类动物的一些体细胞常常丢失整条或部分染色体，而分化产生生殖细胞的那一部分细胞却保留着完整染色体的现象。 2）基因扩增 ：在真核细胞中，某些特定基因的拷贝数有选择性地大量增加的现象 如蟾蜍卵母细胞基因扩增 癌细胞基因扩增 3） 基因重排：DNA分子中核苷酸序列的重新排列 酵母菌不同类型的转换 2. 基因转录水平的调控 1) 顺式作用元件(cisacting elements) 真核基因的顺式作用元件：是指DNA上对基因表达有调节活性的特定的调控序列，其活性仅影响与其自身处于同一DNA分子上的基因。 真核基因的顺式作用元件按功能分为： 启动子(promoter) 增强子(enhancer)； 静止子(silencer)或称沉默基因 。 反式作用因子的结构特征 1、 DNA识别或结合结构域 2、激活基因转录的功能结构域 3、结合其他因子或调控蛋白的调节结构域 锌指结构 锌指结构 螺旋—环—螺旋 mRNA多腺苷酸化 成熟RNA的获得 2）RNA编辑的分子机制 RNA编辑（RNA editing）：对转录后的mRNA编码区进行碱基插入、删除或替换而改变遗传信息的过程。 RNA编辑的分子机制. 3）反义RNA(antisense RNA ): 反义RNA：与mRNA互补的RNA分子，它能与mRNA分子特异性的互补结合，抑制mRNA的加工和翻译 是指构建互补于靶基因mRNA反义核酸分子(反义cDNA真核表达载体),利用转染技术,将此反义cDNA表达载体转入细胞,阻断或减少蛋白的表达 原理：把与mRNA序列互补的或与模板连互补的寡核苷酸转入细胞，是mRNA不能翻译蛋白质，或使模板连不能产生mRNA，从而降低基因的蛋白产物。 5. 翻译后水平的调控 1）蛋白质折叠 2）蛋白酶切割 3）蛋白质的化学修饰 4）切除多肽链中间的内含子序列 帽子结合蛋白 翻译后调控机制 二 翻译后水平的调控 新生肽