《生理科学实验作业汇编》生理科学实验-实验19电惊厥20130308.pptVIP

实验43.药物对抗电刺激引起小鼠惊厥的作用 Experiment 43. Drug resistance induced by electric stimulation in mice convulsion effect 唐法娣 （fadit@) 浙江大学医学院 2013.3 1.预习：理论-方法 2.实验设计。 预习要求 制作小鼠惊厥模型、了解惊厥的发生机制、探索药物对小鼠电惊厥的保护作用。 实验目的 电惊厥法是利用电流刺激动物诱发惊厥，并利用这种实验模型来筛选抗癫痫大发作的药物。目前最常用的方法是最大电休克发作实验(maximal electroshock seizure test,MES)。一般认为，MES是癫痫大发作的实验模型，受试化合物若能明显对抗MES，则该化合物有可能发展成为在临床上治疗癫痫大发作有效的药物。 实验原理 1.苯巴比妥能选择性地抑制癫痫灶中的异常神经元、防止或减少其过度放电，抑制病灶的点燃和传播。这种抑制作用与脑内抑制性递质γ-氨基丁酸的含量增高有关。 2.动物实验表明苯巴比妥能提高电刺激大脑皮层运动区及间脑的最低阈值。 苯巴比妥 的作用机制 动物: ICR小鼠 药品：0.5% sodium phenobarbital 溶液 仪器：JTC-1型惊厥及痛觉实验交流电刺激器 【它是用于电惊厥及痛觉实验的专用交流刺激器： 输出电压范围：0～120伏（50Hz交流电压）连续可调；???? 输出电流：???????不小于100毫安；??? ? 刺激模式：???????单刺激、连续刺激，外触发程控；??? ? 刺激时间：???????0.2、0.3、0.4、0.5、0.6（秒）；??? ? 刺激周期：???????单刺激、1、2、5、10（秒）。】 1. 材料 将“输出电压”调到20伏 刺激时间设为0.5s 刺激周期设为单刺激 如不发生惊厥，将输出电压增大，再试 2.2 操作 先将电惊厥仪输出线的鳄鱼夹尖端用生理盐水浸湿，一个夹子夹小鼠两耳根间的皮肤，另一个夹下颚部。 2. 方法 2.1 准备 将输出电压调到20伏、时间0.5s，刺激周期设为单刺激(第1次电惊厥试验) ↓ 挑选发生电惊厥反应的小鼠（用苦味酸标记1、2、3------） ↙ ↘ ip 0.5%苯巴比妥钠0.1ml/10g ip生理盐水0.1ml/10g ↓ 15min 电惊厥试验(第2次) ↓ 记录结果（+发生惊厥、-未发生惊厥） 2. 方法 2.2 实验流程 2.4 观察 惊厥指标： 双后腿强直 惊厥发生过程： 僵直屈曲期→ 后肢伸直期→ 阵挛期→ 恢复期 2.5 记录结果。 2.6 实验结束将小鼠脱颈处死。 2. 方法 3. 结果 表1. 电惊厥实验结果汇总表 表2. 药物对电刺激引起小鼠惊厥作用的影响 表1. 电惊厥实验结果汇总表 实验 小组 生理盐水组 　 苯巴比妥钠 惊厥 未惊厥 惊厥 未惊厥 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 4.讨论 思考题： 电刺激引起小鼠惊厥的发生机制； 分析苯巴比妥钠抗电刺激引起小鼠惊厥作用的机制。 电惊厥实验有什么意义? 注意事项（1）实验前选择动物,电刺激后不产生后肢强直者不用于实验。（2）注意安全 用右手从笼盒内将小鼠尾部捉住并提起，放在笼盖（或表面粗糙的物体）上，轻轻向后拉鼠尾，在小鼠向前挣脱时，用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，无名指、小指和手掌心夹住背部皮肤和尾部。 小鼠的捉拿方法 小鼠腹腔注射 腹腔注射时，使小鼠头部朝下，将注射针与小鼠腹部皮肤呈90o；由下腹中线偏左或偏右约1-2 mm处下针，约插入3-5 mm即可开始将药剂注入腹腔。 小鼠脱颈处死方法 方法是用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部，右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离。优点：脑干与脊髓分离时动物感觉不到痛的刺激，只破坏脊髓，体内脏器完整无损，适于采样时使用。缺点：施力不当，特别是施力不够时，动物不能立即死亡，会造成动物疼痛以及肺、脾、肾等脏器充血和淤血。 49/