低温诱导植物染色体加倍实验的探究与改进分析.docVIP

低温诱导植物染色体加倍实验的探究与改进分析 　　随着中学生物实施课程改革，从2009年按开始，内蒙古自治区高中生物教材从以前选用人教版全日制普通高中生物教材改为选用人教版新课程标准实验教科用书。《高中生物课程标准》。尊重学生多样化发展的新需求，更贴近实际和生活经验，更重视发展学生的实践能力。《新课标》中明确指出要倡导探究性学习，要让学生勤于动手。 　　与过去的教材相比《新课标》中生物实验的比重明显增加，有些实验是以前教材不要求的，低温诱导染色体加倍实验便是其中之一。实验教学属于必需亲自操作后才能有深刻体会的教学内容，有的实验如果单单照搬教科书上的过程，在实际操作中会遇到许多问题，会对教学效果产生不利影响。因此，对于《新课标》中涉及的实验内容，实验教师要提前感受为好。 面对中学生物《新课标》实施的现实，大学实验课程教学中要有适当的体现，要使生物教育专业的本科毕业生所获得的实践技能能够贴近《新课标》的要求。目前，我校生物教育专业的本科实验教学内容中还没有低温诱导染色体加倍实验的项目，为了促进教学改革，为今后实验项目设计提供帮助，特开展了本实验的研究，以期找到能体现最佳实验效果的方法。 　　1材料与方法 　　1. 1实验材料 　　实验中分别选择了洋葱、大蒜做为实验材料。大蒜生根前放入4℃冰箱以打破体眠期，提高出根率。试验时选取健壮的大蒜瓣，剥去蒜皮，共20枚，每5枚大蒜为一组用细木棍穿起来放入盛有清水的容器中进行室温培养。水以浸没根部为宜，每两天换一次水，根尖3d长到约lcm长，此时将装置转入4℃的冰箱里进行低温诱导。洋葱的培养方法为选取健壮洋葱放入盛有清水容器中，水以没过洋葱根部为宜，每两天换一次水，室温培养。 　　1.2材料处理与方法 　　1.2. 1实验材料的固定 　　固定是借助于物理方法或化学药物的作用，迅速渗入组织和细胞将之杀死，使其形态结构和内含物尽可能地保持生活时的真实状态，本实验用的固定液是卡诺氏液(无水酒精:冰醋酸=3:1)。根据《高中人教版生物必修二》中低温诱导染色体数目化的实验 (以下简称教材)进行实验操作，低温乡导完成后，取约lcm长的根尖(教材上要求取5cm，但根尖应取得稍微长一点，便于从溶液中取，可以在染色时再截至适宜长度)，将其放入卡诺二液中浸泡，教材上要求浸泡0. 5-1h，但在实验中发现用卡诺氏液浸泡根尖0. 5h为最佳，因为洋葱根尖比较细，卡诺氏液本身有杀死细胞的作用，如果固定的时间过长，根尖容易发黄萎蔫，不利于对材料进行观察;另外，固定根尖0. 5h时根尖细胞的分散程度以及固定程度比较好。 　　1.2.2解离 　　解离是为了除去细胞间的果胶以使细胞壁软化，从而使细胞在压片时更易分散;此外还可使细胞相互分离开，防止重叠现象的发生，便于观察细胞中的染色体数目变化。所以，适当延长解离时间可以让细胞的分开程度加大。在本实验的改进中关键是对解离时间的把握。教材上要求用解离液在室温下解离3-5 min，实验发现对根尖解离10min最佳。根尖刚开始解离2min，根尖部位开始发白膨大，5 min后进行染色制片发现根尖不易被捣碎，不能被敲散成雾状，更不易被充分染色，细胞重叠度较大。解离10min后根尖解离达到最佳状态，染色的时候可以被捣碎，从而充分染色，并且在制片的时候，盖玻片盖下的同时根尖就分散开来，且保持根尖形状不变，更容易找到分生区细胞。 　　1.2.3漂洗 　　教材中提到用清水漂洗，但是本实验的漂洗最好用蒸馏水，除了洗去解离液防止解离过度外，也可起到低渗作用，使细胞体积有一定的膨胀，便于以后染色体形态的观察.根尖材料要漂洗三遍，每遍2-3 min，注意动作要轻，不要弄坏了根尖形态。 　　1.2.4染色 　　教材上采用龙胆紫染色或醋酸洋红染色，但是实验发现，用醋酸洋红染液进行制片染色效果更佳，龙胆紫染色不清晰。而醋酸洋红染液是一种细胞核染液，可以使染色体部分染色较深，而细胞质部分基本不染色，染出的装片细胞核明显，便于观察。在取材方面，教材上是把根尖浸泡入玻璃皿中染色3-5 min，这样操作材料染色过深，反而不利于实验的观察，另外根尖经过解离己经变得酥软，如果此时放入染液不容易把根尖完整地取出。为了避免染色过深和对根尖材料的损伤，实验参照林荔等的研究结果进行了改动。在载玻片中央滴一滴清水，用镊子夹起解离、漂洗后的根尖材料放于清水里，用刀片把根尖材料切到合适长度，约5mm，再滴加一滴醋酸洋红染液，用镊子将根尖轻轻捣碎细胞完全分散。这样，不仅核内染色体易被染色，且缩短了染色时间，染色3 min，接着再进行制片。 　　1.2.5制片 　　在盖玻片上铺吸水纸，以手按压，注意力度，防止盖玻片滑