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酶学实验  [目的要求] 掌握 酶促反应速度的影响因素； Km的概念、意义及Km值测定原理和方法。 熟悉 酶促反应的特点； 米-曼氏方程式。 了解 酶的概念。 有许多化学和物理的因素可以直接影响酶的活力，其中最主要的是： 温度 pH 底物浓度 激活剂、抑制剂  参考书目： 《生物化学》[美] LUBERT STRYER 《生物化学检验技术》陈惠黎主编 * * 一、酶的概念  酶（Enzyme）是生物体产生的一类具有催化性质的蛋白质，故又有生物催化剂之称。 它是机体代谢不可缺少的物质，生命活动若没有酶的参与，许多化学反应难以进行。 酶的化学本质是蛋白质，所以对周围环境变化十分敏感：高温、紫外线、重金属盐（Hg）等均可使酶蛋白变性，甚至失活。 二．酶促反应的特点1、高效性  较一般催化剂高出106-1013倍。2、特异性（1）相对特异性： 一种酶作用于一类化合物或一种化学键（2）绝对特异性： 一种酶作用于一种化合物 （3）立体异构特异性：专一性更强 a．旋光异构专一性 b．几何异构专一性 3． 酶活性的可调节性  蛋白水解酶的催化活性受酶作用条件的影响而变化，如： 底物浓度 酸碱度 温度 都可使酶的活性增高或降低，因此酶的催化活性是可调节的。 三．酶促反应动力学 酶促反应动力学主要研究酶催化反应的过程与速率，以及各种影响酶催化速率的因素。 1．温度对酶活力的影响   在酶允许的温度范围内，温度每提高10℃，反应速度增加一倍（但反应平衡点不变，即平衡常数不变）。 一般酶反应最适温度介于35-45℃之间（绝大多数为37-39℃之间）。 2． pH对酶促反应速度的影响（1） 可改变底物的解离状态，从而影响  底物对酶的亲和力。（2） 可改变酶蛋白中某些关键氨基酸的  解离状态，从而影响酶活力。（3） 可影响酶蛋白三维空间的构象状态， 过酸或过碱均可使酶变性。 （4）对某些有多亚基组成的酶蛋白来说，pH还可改变亚基间借以结合的那些基团的解离状态，从而导致因基团解聚而失活。  只有在特定的pH条件下，酶、底物和辅酶的解离状况，最适宜于它们的结合并发生催化作用，才能使酶反应速度达最大值。这个pH值称为酶的最适pH。 3． 底物浓度对酶促反应速度的影响   在低浓度底物时，反应速度随底物浓度的增加而呈直线上升（为一级反应期）；  在高浓度底物时，反应速度上升很少，甚至不再上升（为零级反应期）。 V [S] Vm 一级反应期 零级反应期 混合反应期 0 ?一级反应期：反应速度与底物浓度成  正比。零级反应期：底物浓度远远大于酶浓  度，反应速度达极限值， 即V=Vm。混合反应期：介于零级反应期与一级  反应期之间。 4．??激活剂和抑制剂  凡能提高酶活力的物质都称为激活剂。大部分为无机离子和简单的有机化合物。 酶分子中活性中心上的基团的性质受到某些化学物质的影响而发生改变，导致酶活性的降低或丧失，称为抑制作用。而这些物质则称为抑制剂。 四．米-曼氏方程式  1913年，Michaelis和 Menten经过大量的研究，总结出了著名的米-曼方程式，正确地说明了底物浓度对酶反应速度的影响，进一步使‘中间产物’学说得到普遍承认。 其数学表达式为：  Vm [S] V= Km + [S]  V ：反应速度 Km：米氏常数 Vm：最大反应速度 [S]：底物浓度 Vm① 当[S]《 Km时，则 V= [S]  Km而Vm与Km对这一个酶反应来说为一个常数，因此这时的反应速度正比于底物浓度，反应处于一级反应期； ②?????当[S] 》Km时，Km可忽略不计，则V=Vm，此时反应速度最大，并不再依赖于底物浓度，即使再增加[S]，V也不会增加；这时的反应处于零