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浅析ZnO、CuO 和NiO 纳米颗粒在基质辅助激光解吸电离 　　1 引言 　　基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱( MALDI-TOF-MS) 作为一种软电离质谱技术，在大分子化合物，如蛋白、多聚糖、高聚物等分析领域被广泛应用。基于MALDI-TOF-MS 高灵敏、高通量、保证分子结构完整性等诸多优点，近年来，激光解吸质谱法分析小分子物质引起了研究者们的巨大关注。然而，由于传统的有机基质，例如2，4，6-三羟基苯乙酮( THAP) 、alpha;-氰基-4-羟基桂皮酸( CHCA) 等，在激光的辐照下，将会在小质量数的质谱范围( lt; 500 Da) 内产生大量的基质碎片，从而干扰了小分子物质的检测。为克服这一缺点，一些新型的无机介孔材料、纳米颗粒等，被用来修饰或取代传统的有机基质，达到抑制碎片、简化谱图等效果，实现了小分子物质的检测。其中，金、银等贵重金属纳米颗粒，被广泛应用于MALDI-TOF-MS 分析小分子化合物中。同时，一些光学性能较好的过渡金属氧化物纳米颗粒不断引起研究者的关注，如TiO2，Fe3O4，ZnO 等。过渡金属的种类繁多，不乏可作为无机基质的材料，因此，具有很大的基质开发潜力。 　　本研究重点考察了ZnO 纳米颗粒直接应用于MALDI-TOF-MS 分析糖类和硬脂酸小分子化合物的效果。同时，以L-精氨酸为目标物，初步探讨了CuO 和NiO 纳米颗粒对于选择性离子化小分子物质的可行性。 　　2 实验部分 　　2. 1 仪器与试剂 　　质谱仪器MALDI micro MX TOF-MS ( 美国Waters 公司) ，采用N2激光源，波长为337 nm，实验激光强度设定为8. 0 mu;J。alpha;-氰基-4-羟基桂皮酸( CHCA) 、葡萄糖、纤维二糖、麦芽六糖、硬脂酸、L-精氨酸、纳米级的ZnO ( lt; 100 nm) 、NiO ( lt; 50 nm) 和CuO( lt; 50 nm) ，均购自Sigma 公司。其它有机试剂均为色谱纯，所有实验用水均经过Milli-Q 系统处理。 　　2. 2 实验方法 　　取纳米颗粒4 mg，分别溶于1. 0 mL 乙腈-水( 1∶ 1，V /V) 的混合溶剂，形成4 mg /mL 的基质悬浊液。比较实验中，传统有机基质CHCA 的浓度配制为4 mg /mL，溶剂为乙腈-水( 1∶ 1，V /V) 。对于糖类和氨基酸被测分析物，称取1. 0 mg 固体纯品，分别溶于1. 0 mL 乙腈-水( 1∶ 1，V /V) 的混合溶剂; 配制硬脂酸样品时，称取1. 0 mg 固体纯品溶于1. 0 mL 丙酮溶剂中。MALDI-TOF-MS 分析时，分别取0. 5 mu;L 基质悬浊液和0. 5 mu;L 样品，滴于样品板上并轻微混合。重复以上步骤后，在室温下蒸干溶剂，形成结晶，上机分析。数据分析，采集连续20 张质谱图的累加结果( 每张谱图来自10 次激光随机辐照产生的数据信息) ，作为最终质谱图。仪器导出的数据统一采用Igor Pro 软件作图分析。 　　3 结果与讨论 　　3. 1 ZnO 纳米颗粒直接用于MALDI-TOF-MS 分析糖类和硬脂酸的考察传统有机基质，如CHCA，THAP 等，都具一定的紫外吸收。在MALDI-TOF-MS 分析时，通过吸收紫外波长激光的能量来辅助解吸并离子化基质与样品。因此，作为MALDI-TOF-MS 基质，首先要具有良好的紫外吸收特性。本研究所用MALDI-TOF-MS 配置的N2激光波长为337 nm，实验首先考察了所选用的ZnO 纳米颗粒的光学特性，在337 nm，该ZnO 纳米颗粒具有较强的紫外吸收。糖类化合物极性强，在质谱分析中很难质子化。 　　但是，糖类化合物和Na +、K + 等碱金属离子具有较强的结合力，所以质谱检测中常选择Na +、K + 离子化试剂，对其选择性离子化。考虑到环境和样品中存在Na +、K + 等金属离子，本实验在不添加Na +、K + 离子化试剂的条件下，比较了CHCA 与ZnO 纳米颗粒基质。5. 6 nmol 葡萄糖样品分别与CHCA 与ZnO 纳米颗粒基质混合于样品板上，并在相同条件下进行MALDI-TOF-MS 分析。使用传统有机基质CHCA 进行MALDI-TOF-MS 分析葡萄糖( Glu) 时，在低质量范围内有大量来自基质的碎片，而在m/z 181 很难观测到[Glu + H]+ 离子峰，[Glu +Na]+ ( m/z 203) 离子峰信号强度也较弱。但是，[CHCA + Na]+ 峰的质谱信号非常强。由此推测，CHCA 更易于与Na + 结合。当传统基质CHCA 被ZnO 纳米颗粒替代后