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浅析桃叶珊瑚苷对急性脑出血大鼠脑组织的影响 　　脑出血(ICH)是神经内科一种具有高致死率及致残率的多发病和常见病。目前临床上除运用传统脱水药物治疗外，治疗手段较少。ICH 急性期脑组织发生一系列的病理生理变化，其中炎症反应在ICH 后继发性脑损伤中发挥了重要作用。核转录因子-kappa;B(NF-kappa;B)是一种具有多向转录调节作用的蛋白质， 通过诱导多种炎症因子表达， 在脑缺血及细胞凋亡中起着中心环节的作用。本实验通过观察桃叶珊瑚苷对ICH 大鼠血肿周围脑组织白介素-1beta;( IL-1beta;)和NF-kappa;B 表达及神经功能缺损评分的影响，观察其对脑出血后继发性脑损害的保护作用，以探索脑出血治疗的新思路。现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物 　　健康雄性SD 大鼠90 只，购于上海斯莱克实验动物有限公司，体质量250～270 g。 　　1.2 药物与试剂 　　桃叶珊瑚苷购于四川维克奇生物科技有限公司。免抗大鼠IL-1beta; 和NF-kappa;B 免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物试剂公司; 通用型二抗免疫组化试剂盒购于北京中山金桥生物试剂公司。 　　1.3 分组与造模 　　将大鼠按随机数字表法随机分成假手术组、脑出血组、桃叶珊瑚苷组，每组30 只。治疗组于造模后2 h 给予桃叶珊瑚苷4.2 mg/kg，腹腔注射，每日1 次。假手术组及脑出血组在同样时间给予相同剂量的0.9%氯化钠注射液。参照Rosenberg 等报道的方法制备大鼠脑出血模型。用10%水合氯醛腹腔麻醉大鼠(400 mg/kg)， 将其俯卧位固定在立体定位仪上，调节门齿托的高度，使大鼠前囟前、后囟处于同一水平，沿头皮正中切一长10 mm 切口，无菌操作暴露前囟，定位于前囟前0.2 mm，中线向右旁开3 mm 处钻一直径为0.5 mm 的小孔，进针深度为5.5 mm(即尾壳核位置)。取大鼠尾静脉自体抗凝血50 mu;L，用微量进样器在8～10 min 内缓慢、多次、少量注入，注血结束后留针10 min 后缓慢退针， 局部用骨蜡封闭后缝合皮肤。假手术组于相同部位注入等量无菌0.9%氯化钠注射液。以术后见明显肢体瘫痪，大鼠脑切片中有明显的圆形、椭圆形或不规则形的血肿存在为模型成功标准，不符合以上标准及死亡者剔除。所有操作均在无菌条件下进行， 术毕将大鼠放回笼中饲养， 自由活动进食进水。 　　1.4 观察指标 　　1) 大鼠神经功能缺损评价。参照Longa 5 级评分法，对神经功能评分。0 级：无体征，记0 分。1 级：动物不能完全伸直其前肢，记1 分。2 级：动物一侧肢体瘫痪，有追尾现象，记2 分。3 级：动物不能站立或打滚，记3 分。4 级：无自发性活动， 有意识障碍记4 分。2)免疫组织化学染色检测IL-1beta; 和NF-kappa;B 的表达。每组设置12 h、2 d、3 d、5 d、7 d 等5 个时间点，每个时间点6 只大鼠。在相应时间点用水合氯醛深度麻醉大鼠，剑突下横切口，沿膈肌与胸廓交界处剪开膈肌，暴露心脏，于心尖向上进针，插入升主动脉，固定针头， 剪开右心耳， 快速滴入37 ℃ 0.9%氯化钠注射液100 mL，至右心耳流出液体变清亮，后用4%的多聚甲醛(0.1 mmol/L PBS 配制，pH 7.2~7.4)灌注(10 mL/min)，先快后慢，约250 mL。断头开颅取全脑，去除嗅脑、小脑和低位脑干， 将脑组织置于浓度为4%的多聚甲醛中固定48 h。于穿刺针点为中心分别向前、后各移1.0 mm 将脑组织冠状切开，修成包含出血区及周边区的4 mm、厚约2 mm 的脑片，常规石蜡包埋，然后在切片机上连续切片，片厚2 mu;m，行IL-1beta; 和NF-kappa;B 免疫组化染色。切片常规脱蜡至水，0.01 M 柠檬酸钠缓冲液微波修复10 min; 滴加一抗，4℃过夜，PBS 液漂洗2 mintimes;3 次;加二抗，37℃ 孵育30 min，PBS 漂洗2 mintimes;3 次;DAB 显色，中性树胶封片。在400 倍视野下，用计算机图像分析系统软件随机观察并计数血肿周围4 个不重复视野的不同时间段大脑IL-1beta; 和NF-kappa;B 阳性细胞数，取其平均值。 　　1.5 统计学处理 　　应用SPSSl3.0 统计软件进行分析。计量资料以(xplusmn;s)表示，进行单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t 检验。Plt;0.05 为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 各组神经功能缺损评分比较 　　假手术组无明显神经功能缺损， 脑出血组与桃叶珊