浅析肾消康对骨质疏松，骨胶原重塑的影响.docVIP

浅析肾消康对骨质疏松，骨胶原重塑的影响 　　糖尿病骨质疏松症(diabeticosteoporosis，DOP)是糖尿病的常见并发症之一，属代谢性骨病，具体表现为单位体积内骨量减少、骨组织微结构改变、骨强度减低、骨脆性增加等。由于其常起病隐匿，故被称为是“无声无息的流行病”。近些年来，由于糖尿病患者的逐年增加，糖尿病骨质疏松症的发病率愈发增高，且糖尿病患者一旦发生骨折，致残、致死率极高，医疗费用庞大，故如何防治糖尿病骨质疏松症的研究越来越受到专家学者的重视。目前，临床上尚无有效的防治DOP的药物，故本研究确立”补肾益脾、化浊活血”为治疗大法，以创立的经验方“肾消康”为底方，通过对糖尿病性骨质疏松症模型大鼠胫、腰椎骨组织标本进行扫描电镜观察，以期明确该方、该法对改善糖尿病骨质疏松状态的疗效，从而希冀进一步研发治疗糖尿病性骨质疏松症的临床药物。 　　1　材料与方法 　　1.1　实验动物 　　雄性Wistar大鼠73只，体质量(200plusmn;10)g，由哈尔滨医科大学提供，合格证号： 　　1.2　药品与试剂 　　1.2.1　实验药物及制备　肾消康主要药物为：熟地黄、淮山药、山萸肉、牡丹皮、茯苓、陈皮、黄芪、人参、水蛭、枸杞子、葛根等。取上药材按特定配比经醇沉水提法制成浸膏备用，每毫升浸膏含生药量0.79g。 　　1.2.2　实验用主要试剂　造模试剂为链脲佐菌素由CALBIOCHEM公司提供;血糖生化分析试剂盒由北京中生生物工程技术公司提供;糖化血红蛋白试剂盒由立德曼公司提供;血清胰岛素样生长因子1放免试剂盒由北京北方生物技术研究所提供。 　　1.3　分组与给药 　　取Wistar雄性大鼠73只，随机选15只作为空白对照组，左下腹注射柠檬酸缓冲液25mg·kg-1，连续给药5d，普通饲料喂养。其余58只制作糖尿病模型，于每天上午左下腹腔注射注射链脲佐菌素(25mg·kg-1)，连续给药5d。造模1周后检测血糖值，血糖值ge;16.7mmol·L-1则认为造模成功。再随机分为模型组、治疗组，两组均喂以高热量饲料13周，再继续以普通饲料喂养13周。喂养19周后，将各组大鼠空腹称质量，治疗组给药体积为每100g给药10mL，给药剂量为7.9g·kg-1，灌胃给药1次·d-1;空白组、模型组给予同体积生理盐水。 　　1.4　标本采集 　　1.4.1　采血　在26周末(禁食水12h后)摘出眼球取血，测血糖、血清胰岛素、糖化血红蛋白、血清胰岛素样生长因子等指标。 　　1.4.2　骨组织标本制备　分别取大鼠胫骨及腰椎，用生理__盐水清洗至骨小梁清晰可见为止，体积分数2.5%戊二醛固定，0.2mmol·L-1PBS磷酸缓冲液冲洗，体积分数15%次氯酸钠溶液浸泡(注意：空白组、治疗组、模型组应根据标本具体情况确定浸泡时间，以免腐蚀不及或太过)，用蒸馏水清洗，超声清洗，0.2mmol·L-1 PBS磷酸缓冲液再次漂洗，乙醇逐级脱水，乙醚浸泡30min，常温下空气干燥，真空喷金，JSM5610扫描电镜观察。 　　1.5　统计学方法 　　采用SPSS20.0软件处理，结果以均数plusmn;标准差(珋xplusmn;s)表示，组间比较采用t检验。Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　2.1　一般状况观察　分别对空白组、治疗组、模型组大鼠的精神、运动、饮食、体质量等一般状况进行观察，发现模型组状况较差，致残、致死率高;治疗组大鼠一般状况优于模型组。通过对大鼠一般状态的观察，可以认为中药复方肾消康确有改善糖尿病大鼠健康状态的作用。 　　2.2　各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白、血清胰岛素、胰岛素生长因子1水平检测　2.3　扫描电镜图像分析 　　2.3.1　胫骨骨胶原组织　空白组大鼠胫骨骨胶原表面平整光滑致密，胶原走行整齐而有规律;模型组大鼠胫骨的骨小梁表面骨胶原受到明显破坏，表现为骨胶原表面光泽度降低、凹凸不平，骨胶原结构变得松散、断裂，甚至个别区域出现塌陷区;治疗组大鼠胫骨骨胶原组织表面光滑而有一定光泽度，排列较平整、紧密整齐，且胶原纤维走向比较清晰而有规律，视野内未见骨胶原断裂或塌陷区。 　　2.3.2　腰椎骨胶原组织　空白组大鼠腰椎骨胶原组织排列整齐、紧致，光泽度好;模型组大鼠腰椎骨胶原组织近于消失，骨基质完全暴露，表面枯槁、无光泽;治疗组大鼠腰椎骨胶原组织恢复显著，表面较平整且有光泽，胶原纤维排列紧致而有规律，但存在少数断裂现象。通过扫描电镜观察发现：①糖尿病对大鼠腰椎骨组织胶原结构的负面影响较胫骨骨胶原更为严重;②基于“补肾益脾、化浊活血法”创制的“肾消