浅谈地表水体中同时分析18 种糖皮质激素方法的建立.docVIP

浅谈地表水体中同时分析18 种糖皮质激素方法的建立 　　水环境中内分泌干扰物质的污染及其引起的生态健康效应，特别是通过干扰性激素信号通道引起发育繁殖异常，是过去20 年国际上关注的热点问题. 随着研究的深入，科学家们发现一些具有激素活性的合成药物和个人护理品等进入环境水体同样可能会影响其他激素受体( 如糖皮质激素受体) 相关的生命/生理活动. 最新的研究结果显示糖皮质激素效应物质可能普遍存在于环境水体中，并且可能已经达到了对人类和水生生物造成负面影响的水平. 然而，与雌激素等性激素的环境行为研究相比，糖皮质激素及其合成药物在环境水体中的浓度水平、来源分布和迁移转化等研究还非常有限，其中一个重要原因就是缺乏识别和定量检测复杂环境介质中该类物质的高灵敏分析方法.糖皮质激素是一类重要的内分泌激素，几乎参与了人类和动物所有的生命活动. 鉴于其重要的生理功能，大量的糖皮质激素合成药物( 30 种以上) 被广泛应用于人类医疗和兽药使用，而且由于极性较强和不易吸附于生物体的特点，糖皮质激素药物的50% ～ 90% 很快随着尿液和粪便排出体外，进而通过各种途径进入环境，通常在ng·L - 1级别或者甚至更低的浓度水平. 由于糖皮质激素药物结构非常类似，其导致的毒性往往是其混合物共同作用的结果，所以尽可能多的展现这类污染物的环境含量组成特征非常必要，特别是一些生物效应强的药物化合物，即使环境浓度相对较低也可能对生物造成不容忽视的毒性效应. 但是目前关于糖皮质激素的环境分析方法还主要集中于氢化可的松、可的松、泼尼松龙、泼尼松、地塞米松和甲泼尼龙等几种化合物. 一些药效或激素效应更强的卤代药物化合物( 如氟米松、曲安西龙、曲安奈德、倍氯米松、氟米龙和丙酸氯倍他索) ，以及一些更加常用的易转化的酯化前体药物( 如醋酸氟氢可的松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松和醋酸地塞米松) 等更广泛的糖皮质激素很少包括在内. 因此，本研究针对18 种糖皮质激素物质，包括6 种卤代药物和4 种酯化前体药物，应用固相萃取技术结合超高效液相色谱串极质谱联用系统( ultra performanceliquid chromatography-tandam mass spectrometry，UPLC-MS /MS) ，建立高灵敏同时分析方法，并应用于北京市地表水体，初步调查糖皮质激素的浓度水平及其组成特征，以期为后续的环境行为和风险评估研究奠定基础. 　　1 材料与方法 　　1. 1 仪器与试剂 　　ACQUITYTM超高液相色谱仪，Micromass-QuattroUltimaTM Pt 质谱仪( Waters 公司，美国) ，MassLynxV4. 1 软件; N-EVAPTM 116 氮吹仪( Organomation 公司，美国) ，Oasis HLB 固相萃取柱，玻璃纤维滤膜( GF /C，1. 2 mu;m 孔径，Whatman 公司，英国) ; 甲醇、乙酸乙酯和乙腈( 色谱纯，Dikmapure公司) ，甲酸和乙酸( 纯度为99%，Acros Organics 公司) ，实验用水均为超纯水( 电阻率18. 2 MOmega;·cm，Millipore 公司超纯水器制备) . 　　糖皮质激素标准样品: 醛固酮( aldosterone) 、泼尼松( prednisone) 、可的松( cortisone) 、氢化可的松( cortisol ) 、泼尼松龙( prednisolone ) 、氟米松( flumethasone) 、地塞米松( dexamethasone) 、曲安西龙( triamcinolone) 、醋酸氟氢可的松( fludrocortisoneacetate) 、曲安奈德( triamcinolone acetonide) 、甲泼尼龙( methylprednisolone ) 、倍氯米松( beclomethasone) 、醋酸可的松( cortisone acetate) 、醋酸氢化可的松( cortisol acetate ) 、氟米龙( fluorometholone) 、醋酸地塞米松( dexamethasoneacetate) 、布地奈德( budesonide) 、丙酸氯倍他索( clobetasol propionate) ( 所有标准品纯度均大于或等于98%， sigma 公司) . 皮质醇激素同位素内标为cortisol-d4，来自于C /D/N Isotopes ( Montreal，加拿大) . 18 种糖皮质激素结构如图1 所示.糖皮质激素标准储备液及工作液的配制: 分别称取标准糖皮质激素样品各10. 0 mg 用甲醇溶解后转移至10 mL 棕色容量瓶，用甲醇定容后于- 20℃