PCR引物设计及相关软件的应用--超实用3幻灯片.pptVIP

Stability Per 5-mer Oligo 6.44 使用说明 主要功能：专门的引物设计软件 Oligo 6.44 启动界面 Open sequence file 3个弹出窗口 Melting temperature ?G Internal Stability Frq为邻近6至7 个碱基组成的亚单位在一个指定数据库文件中的出现频率。该频率高则可增加错误引发的可能性。 用Oligo 设计引物时的3个标准 Tm 值曲线以选取5’到3’的下降形状有利于引物引发聚合反应。 Frq 曲线宜选用3’端Frq 值相对较低的片段。 ΔG 值在5’端和中间值比较高，而在3’端相对低 选中引物 上游引物 下游引物 只是示意图 引物分析 首先检查引物二聚体尤其是3’端二聚体形成的可能性。 引物分析 二项检查是发夹结构（hairpin）；与二聚体相同，发夹结构的能值越低越好。 引物分析 第三项检查为GC 含量，以45-55％为宜。 第四False priming 检查 引物分析 Key information of primer Hairpin Dimer and cross Dimer GC% Total PCR information Final PCR information Search for primer using Oligo 6.44 Search primer