2012级《微生物与微生物工程实验》实验报告.docx

生命科学学院《微生物与微生物工程实验》实验报告学生姓名： 宋文康 学 号： 201274020123 年级专业： 2012级生物技术 小组成员：曹海锋 孙向龙 马红兵 李鹏辉 指导教师： 达文燕 孔维宝 完成时间： 2014年12月4日 实 验 报 告 撰 写 说 明1、各班根据实际实验内容，确定淀粉酶或蛋白酶的种类。2、实验方法和实验结果要分开写，切忌混写，即方法部分中不要出现实验结果的内容，结果部分不要介绍方法。3、实验方法部分内容要尽量详细介绍。4、2.2.6部分要根据各班实际实验设计内容详细说明培养基的组成及培养条件。5、实验结果部分内容根据实际实验结果撰写；图和表都必须要有标题，根据内容顺序按表1、表2…或图1、图2…按顺序列出；图的标题在图下方，横纵坐标轴需要时都要有标题和单位；表的标题在表上方，须绘制成三线表。如下所示：图*：表*：表头部分6、分析与论部分内容可结合本实验实际结果和课程所学理论知识展开讨论；结论部分只做文字性总结，不出现图表。7、第5、6部分必须认真思考撰写，内容不可缺。8、第7部分内容要小组成员讨论决定，结果直接决定成绩的高低，请认真对待。9、内容定稿后请更新目录：菜单栏/引用/更新目录/只更新页码。10、正文文本字体为宋体，数字、英文等为Times New Roman，小四号，1.25倍行距，目录和1-3级标题的字体格式尽量不要调整。11、本范本仅供参考，框架和标题内容不完备、不合理之处同学可自行修整。12、实验一和实验二的实验报告内容请参照其他实验课程常规格式和课堂要求撰写，不做特殊要求。目 录1 实验背景、目的和意义12 材料与方法12.1 材料与试剂12.2 实验方法22.3 分析方法73 结果与分析83.1 实验结果83.2 分析与讨论134 主要结论145 实验中存在的问题及对策分析146 对实验改革的意见和建议157 参考文献158 小组成员名单、分工及贡献率16产淀粉酶菌种的分离、筛选、鉴定和产酶条件优化学生姓名 宋文康（西北师范大学生命科学学院2012级生物技术）1 实验背景、目的和意义自然界中蕴藏着种类丰富的的微生物资源。土壤是微生物生存的大本营，是微生物最为重要的资源库。从自然界中筛选具有特定功能的优良菌种是微生物工作者的一项重要任务，也是一件极其细致和艰辛的工作。获得具有优良形状及潜在产业化生产能力的功能微生物通常需要达到“亿万挑一”的地步。淀粉酶在工业酶制剂生产中占有十分重要的地位 ，广泛应用于粮食加工 、食品工业 、酿造、发酵 、纺织品工业和医药行业 ，居市场份额第一。但是，我国的α一淀粉酶制剂的品种和生产菌株都很单一，α一 淀粉酶酶活也较国外同行业低 。淀粉酶的生产主要依靠微生物发酵。生产菌种选育近年来尽管转导转化和基因克隆等分子生物学技术已经广泛应用，但是这些方法成本较高，目前投入商业化生产的α一淀粉酶生产菌株几乎都是通过从自然界中分离得到的野生型菌株。因此不断从自然界中分离淀粉酶产生菌，并探索其最佳发酵条件有重要意义 。本实验从自然界中分离产淀粉酶的菌株，通过纯化测定水解圈的大小初步确定酶活力的强弱，然后进行液体培养用还原糖法测定酶活力较强的菌株，最后改变碳源，氮源，淀粉含量，PH，菌体浓度等确定最佳培养条件。获得最佳的产酶条件，以期进一步改良，适应于工业生产需求。 2 材料与方法2.1 材料与试剂2.1.1 实验材料6个盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶,制霉菌素母液（抑制真菌）。 高压蒸汽灭菌锅、干燥箱、恒温培养箱、无菌涂布器、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿（9对）、无菌刻度吸管、酒精灯、试管架1个、接种环1个、接种针1个、接种钩1个、滴管等。2.1.2 试剂药品1、淀粉培养基: 可溶性淀粉2%、蛋白胨1% 、氯化钠 0. 5%、牛肉膏0. 5%、琼脂粉2% 。（按配制100ml培养基计算）2、固体培养基：淀粉6g，酵母膏13g，氯化钠5g，添加1．O％的吐温于1000mL蒸馏水中；最佳培养条件为：初始pH值为7．5；培养温度为37℃ ，培养时间36h。原碘液 称取碘11g，碘化钾22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500ml，储于棕色瓶中。稀碘液 吸取原碘液2ml，加碘化钾20g并用水定容至500ml，储于棕色瓶中。可溶性淀粉液 称取可溶性淀粉2g，用温水调成浆状，在搅动下缓缓倾入70ml沸水中，然后以30ml水分几次冲洗装淀粉的烧杯，加热至完全透明，定容至100ml。磷酸缓冲液 称取磷酸氢二钠45.23g，柠橄酸8.07g，用水溶解并定容至1000ml，配好后用PH试纸校正至PH=6.0.液体发酵培养基 采用牛肉膏蛋白胨培养基加2％可溶性淀粉，即牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaC1 5g、可溶性淀粉2g溶