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纳米材料在蛋白磷酸化分析中的应用浅析 　　蛋白质是生理功能的执行者，是生命物质的基础，对蛋白质结构和功能的研究是生命科学研究中的重点。翻译后修饰是调节蛋白质功能的重要方式，对其的研究对于阐明蛋白质的功能具有重要作用。蛋白磷酸化是蛋白质翻译后修饰的一种，是在ATP存在下，通过蛋白激酶催化ATP 位的磷酸基转移到底物蛋白质氨基酸上的过程。其在胚胎发育、细胞增殖、新陈代谢、细胞信号传导方面具有重要的调节作用，是生物体中常见的调节方式。当其调节发生异常时，会导致癌症、心脏病等疾病的发生。因此，对蛋白磷酸化的研究有助于更好地了解细胞的信号通路过程，有利于疾病的诊断和治疗。然而，由于磷酸化肤段在生物样品中的含量较低且易受到非磷酸化肤段的干扰等主要缺点的存在，为检测工作带来很大的困难。因此，克服以上瓶颈和困难，实现蛋白磷酸化的高灵敏检测，对于疾病早期快速诊断具有非常重要的意义。目前，蛋白磷酸化的检测方法主要有:放射性检测、荧光法、表面等离子体共振、质谱、电化学、WesternBlot及ELISA等。近年来，随着纳米技术的快速发展，将纳米技术运用于蛋白磷酸化的高灵敏分析受到越来越多的重视。 　　纳米材料按照结构可分为:零维纳米材料(包括金属纳米粒子、量子点和磁性纳米粒子等)、一维纳米材料(如碳纳米管等)、二维纳米材料(典型代表是石墨烯)。因纳米材料大的比表面积、丰富的键合位点、良好的生物相容性和催化活性以及独特的结构，为高灵敏、高选择性生物分析提供了动力，在DNA分析酶传感、生物小分子的检测等领域被广泛应用，同时也为蛋白磷酸化分析带来新的机遇。 　　本文基于选择性识别或捕获磷酸化的肤段或蛋白的主要机理，综述了近几年纳米材料在磷酸化肤段的富集和信号放大方面的应用，及其在高灵敏蛋白磷酸化分析中的研究进展并进行了展望。 　　1磷酸化肤段或蛋白的富集及信号放大机理 　　1. 1基于纳米材料的富集机理 　　为排除非磷酸化的肤段或蛋白的干扰，选择性识别或捕获磷酸化的肤段或蛋白是非常重要的一步。利用纳米材料选择性富集磷酸化的多肤或蛋白的常见方式是通过化学亲和作用，一种是采用金属氧化物作亲和探针，其中金属氧化物的路易斯酸度是影响金属氧化物亲和性的主要因素①具有最强酸度的金属氧化物，因可与非磷酸化多肤键合，致使检测存在着很严重的非特异干扰。②具有较强酸度的金属氧化物对磷酸化肤存在强的键合力，因为多磷酸化肤不易洗脱，致使优先检测单磷酸的多肤。③具有较低酸度的金属氧化物因与单磷酸化肤弱的相互作用，可选择性地亲和多磷酸化的肤。另一种是金属离子与磷酸根的作用。关于金属离子与磷酸根的相互作用存在着争议，有文献认为金属离子与磷酸根是静电吸附作用，而有的文献则认为它们之间作用力的强度远大于静电作用。 　　1. 2基于纳米材料的信号放大机理 　　近几年，信号放大技术尤其是基于纳米材料的信号放大在磷酸化的超灵敏检测中受到了广泛关注。如何既能选择性识别磷酸化肤段或蛋白，又能结合信号放大部分，以实现磷酸化肤段或蛋白检测信号的放大是其关键步骤。较常用的识别或连接方式主要有两类:①生物亲和作用，②化学键合作用。而基于纳米材料信号放大的机理主要归于以下两个方面:①纳米材料作载体。因为纳米材料独特的生物相容性和大的比表面积以及易于修饰的特性，使其非常有利于用作载体以增强探针的量。通常纳米材料作为一个基底元素用来富集目标分子或信号分子，以实现信号的放大。②增强导电性。一般纳米材料的导电性比较优越，因此可加快电子传递的速率，提高信号响应。 　　2基于纳米材料对磷酸化肤段或蛋白的预富集 　　由于非磷酸化多肤的干扰和磷酸化多肤本身的丰度低等问题，导致研究者对蛋白磷酸化位点的鉴定和分析存在很大的困难。因此，对磷酸化的肤段或蛋白进行选择性富集，以提高磷酸化组分的相对含量，降低非磷酸化组分的干扰显得十分重要。纳米材料及其复合物因为价格低，纳米表面易于功能化，与磷酸化肤之间的结合力强，而被广泛用于蛋白磷酸化的富集和分离。 　　2. 1介孔纳米材料 　　近几年，介孔材料在纳米科学领域中占据重要的地位，基于其独特的微纳米尺寸效应，如大的比表面积、多孔结构等，介孔材料被应用于不同的生物领域。 　　金属氧化物纳米粒子因独特的表面效应、超顺磁性、小尺寸效应和量子隧道效应等特性，使其表面易于富集磷酸化多肤。早期的研究主要是将单一的纳米金属氧化物填充在柱体中或移液器吸头内进行磷酸化肤段的预富集。2009年，Ge等首次将制备的介孔二氧化错纳米材料用于高效选择性富集磷酸化的肤段。与纳米金属氧化物材料相比，介孔纳米材料因其超大比表面积以及许多活性位点，而具有更强的键合磷酸根的能力。随后，介孔二氧化钦和介孔二氧化铅纳米材料也被