讨论液相色谱法测定抗风湿类中成药中的多种糖皮质激素.docVIP

讨论液相色谱法测定抗风湿类中成药中的多种糖皮质激素 　　风湿性疾病是一种以骨、关节、肌肉及关节周围组织病变为主，以疼痛、晨僵和疾病的慢性进展、畸形等为临床症状的骨骼肌肉疾病。糖皮质激素是临床常用的药物，有较强的抗炎以及免疫抑制作用，具有较好的治疗效果。但是糖皮质激素在改变病理过程的同时也会对原有的生理平衡产生影响，并诱发多种并发症的发生，长期大量使用糖皮质激素，可能会导致各种不良反应的发生。一些不法企业为了谋求暴利，在中成药中违法添加糖皮质激素，对患者的用药带来了极大的安全隐患。本文建立了一种同时测定抗风湿类中成药的多种糖皮质激素的检测方法，方法简便快速，可在30 min 内完成检测，现报道如下。 　　1　仪器与试药 　　日本岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪;瑞士Mettler AE-240 电子分析天平。Milli-Q 超纯水器。曲安西龙对照品( 批号100333-200201);氢化可的松对照品(批号100152-200206);地塞米松(批号100129-200804);醋酸泼尼松龙对照品( 批号100124-200303);醋酸氢化可的松对照品( 批号100013-200107);醋酸泼尼松对照品(批号100012-200706);醋酸可的松对照品(批号100123-200303);醋酸地塞米松对照品(批号100122-200805)均购于中国药品生物制品检定所。甲醇、乙腈(色谱纯， Merck);其余试剂均为分析纯。 　　2　实验方法 　　2.1　色谱条件 　　色谱柱为Inertsil(250 mm times; 4.6mm，5 mu;m)ODS 柱;流动相为乙腈: 水 = 40 : 60，流速为1.0 ml·min-1;柱温为40℃，DAD 检测器(190~ 400 nm)，检测波长241 nm ;;进样量为10mu;l。各成分的理论塔板数均大于5 000，相邻峰的分离度均大于1.5。 　　2.2 　标准溶液的配制 　　分别精密称取上述的8 种激素标准品适量，用甲醇溶解并定容，配制成约为50 mu;g·ml-1 的对照品储备液。再精密量取上述对照品储备液，加甲醇稀释成8 种对照品的质量浓度均分别为2.50，5.00，10.00，20.00，40.00mu;g·ml-1的系列混合对照品溶液。 　　2.3　样品溶液的制备 　　称取样品0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，超声提取20 min，室温放冷后，加甲醇补足重量。取适量提取液离心10 min 后，取上清液，经0.45mu;m 微孔滤膜过滤，即得。 　　2.4　线性关系及检测限 　　将“2.2”项下系列不同浓度(2.50，5.00，10.00，20.00，40.00mu;g·ml-1)的混合标准溶液依次进样，记录色谱图，以质量浓度X 为横坐标，峰面积Y 为纵坐标进行线性回归，在线性范围内8 种成分的质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系。 　　2.5　检出限和定量限 　　取对照品储备液加甲醇进一步稀释至不同浓度，依法测定，以3 倍信噪比估算检出限。 　　2.6　精密度试验 　　取混合对照品溶液，连续进样5 次，计算各激素峰面积的RSD 为0.11 ~ 0.57%，表明精密度良好。 　　2.7　稳定性试验 　　取混合对照品溶液，在0、2、4、6、8、12 h 进样，结果各激素的RSD 均小于1.5%，表明稳定性较好。 　　2.8　回收率试验 　　称阴性样品0.5 g，平行6 份，加入5 ml 22.0mu;g·ml-1 的混合对照溶液，按照样品制备方法制备得供试品溶液。按色谱条件测定含量，计算回收率。 　　2.9　样品分析 　　采用上述方法对17 批样品进行测定，检出有3 批样品不同程度的含有部分上述糖皮质激素，检出率为17.6%。 　　3　讨论 　　3.1　流动相的选择 考文献，最后综合考虑各化合物的峰形及分离度等因素，确定“ 2.1”中的流动相色谱条件，无需进行梯度洗脱，同时此流动相系统也用于下一步的液质联用的确证试验。 　　3.2　柱温的选择　考察了20、25、30、35、40℃等柱温条件下各成分色谱峰之间的分离度，结果表明当柱温为40℃时，各成分之间分离效果最佳。 　　3.3　检测波长的选择 通过DAD 全波长扫描，发现8 个糖皮质激素在241 nm 处有最大吸收波长，故选择241 nm 为检测波长。 peBnD 　　3.4　本文所建立方法简便准确，可应用于抗风湿类中成药中此8 种糖皮质激素的分析，样品检出率达17.6%，其检出结果须进一步采用HPLC/MS 进行确证。