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详谈猴体神经毒力试验在减毒活疫苗中的应用 　　猴体神经毒力试验的应用已有50 多年的历史，在保证疫苗安全性方面做出了巨大贡献。出于对减毒活疫苗的安全性考虑，当从具有中枢神经系统靶向性的野毒株中分离得到减毒疫苗株时，大多数国家的药品注册法规均要求开展猴体神经毒力研究，以评价减毒疫苗株的安全性。减毒疫苗株的神经毒力试验通常在临床前研究阶段开展，疫苗上市后当发生较重大的工艺变更时，应考虑重新进行神经毒力研究。对于脊髓灰质炎减毒活疫苗，建议对每个批次的单价原液检测神经毒性，并作为放行依据之一。但猴体神经毒力试验的方法在不同法规之间尚缺乏统一的标准，有些疫苗缺少合适的参考品，结果判定具有一定的主观性，且费用十分昂贵。同时，由于伦理学及实验动物使用3R 原则，非人灵长类动物在世界各地越来越难以获得。更重要的是，近十几年的研究表明，猴体神经毒力试验在检测腮腺炎毒株时，无法区分出不同减毒株和野毒株，通过猴体神经毒力试验的腮腺炎减毒活疫苗经临床应用发现，能引起脑膜炎和脑炎。上述问题的出现使得猴体神经毒力试验的开展存在争议，引发了世界卫生组织(World Health Organization，WHO)、食品和药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)及欧洲联盟(European Union，EU)等国际组织及药品监管机构对猴体神经毒力试验科学性、合理性及必要性的重新论证与评估。本文对猴体神经毒力试验存在的问题、替代方法及其在不同减毒活疫苗安全性评价中的应用作一综述，以供相关研究机构参考。 　　1 猴体神经毒力试验存在的问题2005 年，由国际生物标准化协会(InternationalAssociationforBiologicalStandardization，IABS)、WHO、欧洲药品质量管理局(European Directorate for QualityMedicines，EDQM)、FDA 生物制品评价和研究中心(Center for Biologics Evaluation and Researh，CBER)与EU 等共同参与的关于减毒活疫苗神经毒力试验的工作会议在日内瓦召开，会议目的是针对减毒活疫苗开展神经毒力试验存在的问题与必要性进行讨论并达成共识[4]。根据此次会议，并参照近年来国际组织及各国研究机构发表的文献，对减毒活疫苗猴体神经毒力试验存在的主要问题总结如下。 　　1. 1 猴体神经毒力试验方法在不同法规之间存在差异猴体神经毒力试验最早用于已知具有神经毒性毒株的评价，如脊髓灰质炎毒株及黄热病毒毒株。此后，《欧洲药典》(European Pharmacopeia，EP)等逐步将猴体神经毒力试验作为减毒活疫苗评价的常规要求。但对于某些疫苗，WHO、EU、FDA 及《日本药典》等收载的具体试验方法之间存在差异，其中有的规定病毒主种子批、工作种子批及疫苗批均可进行神经毒力试验，而有的则规定所有病毒种子批均需进行试验。由于方法不统一，已开展的许多猴体神经毒力研究采用不同的病毒剂量、不同的接种方式以及不同的评分系统，致使某些试验结果难以解释，最终导致判定结论时缺乏统一的标准。对于病理学检查的组织部位也有所不同，如针对腮腺炎毒株的猴体神经毒力试验是模仿脊髓灰质炎病毒相关试验建立起来的，并无针对腮腺炎病毒特定靶向部位脑室系统的检查，缺乏方法的特异性。此外，对于很多毒株，试验时无合适的参比疫苗，如现有黄热减毒活疫苗的参比疫苗神经毒性很弱，而风疹减毒活疫苗缺乏阳性对照，由此可能导致得出错误的结论。目前，FDA 已不在《美国联邦法规》(Code of Fe-deral Regulations，CFR)中规定猴体神经毒力试验的方法，具体参见WHO及EP收载的方法。而EP已于2006 年开始逐步采用WHO 规定的试验方法，在一定程度上推动了神经毒力试验方法的统一，但目前尚未完全消除由于试验方法差异为结果判定造成的影响。 　　1. 2 猴体神经毒力试验对个别减毒活疫苗不适用对于腮腺炎减毒活疫苗，有些毒株如Jeryl Lynn株和RIT-4385株已显示出良好的安全性。但20 世纪90年代初期，已通过猴体神经毒力试验的很多腮腺炎疫苗株，如Urabe AM9、Leningrad-Zagreb、Leningrad-3、Hoshino、Torii、Sofia-6 株，接种后却出现了高发的脑膜炎和脑炎，一度引发日本等国家停用腮腺炎减毒活疫苗。1999年，FDA CBER联合加拿大OTTAWA大学开展了一项针对腮腺炎病毒特异性猴体神经毒力试验的研究，目的是在此前研究的基础上建立一种标准的试验方法。研究结果表明，两种腮腺炎野毒株显示出比疫苗株更高的神经毒性，但无法从统计学上区分出减毒株和野毒株，