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详谈藤黄果提取物对雄性大鼠脂代谢的影响 　　在现代社会，肥胖的发生率越来越高，无论在发达国家还是发展中国家，都已成为重要的健康问题。肥胖是很多疾病的重要诱因，例如：关节炎、糖尿病、心脑血管疾病及高血压甚至癌症。肥胖表现为长期的食物摄入与能量支出的失衡。因此，抗肥胖的食物或食品添加剂如果能够有效地减少脂肪堆积，就可以避免肥胖，进而对肥胖引起的疾病起到一定的预防效果。藤黄有与众不同的酸味，南亚的许多国家作为调料一直使用了几个世纪[5]。常用作研究的为Garciniacambogia，又称马拉巴尔罗望子(Malabar tamarind)，是一种小型或中型的藤黄科果树，其果实已被用于提升肉类及海鲜的风味，调制饮料，还曾经用于鱼类的保鲜。(-)-羟基柠檬酸((-)-hydroxycitric acid，(-)-HCA)是藤黄果提取物中的主要成分。人体实验大量研究发现，(-)-HCA可以通过抑制脂肪的合成、抑制食欲等机制，从而达到减轻体质量的功效，且目前已经有商品化的健康食品投入市场。虽然藤黄果提取物及其主要成分(-)-HCA因具有独特的生物学功能而引起生物学家的广泛关注，但其调控机体脂肪代谢的生物化学机制还不是很清楚。因此，本实验以雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为研究对象，探讨长期饲喂藤黄果提取物对SD大鼠体质量、脂代谢常规生化指标及相关基因表达的影响，以期为其作为降脂调节剂在人类医学和畜牧生产中的应用提供理论基础和实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与仪器 　　藤黄果提取物 郑州安誉科技有限公司。(-)-羟基柠檬酸(纯度56%～58%) 上海微谱化工技术服务有限公司;总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、游离脂肪酸(freefatty acid，FFA)、血糖检测试剂盒 南京建成生物工程研究所;反转录所用试剂 美国Vazyme Biotech公司。UV-2100型分光光度计 上海尤尼柯仪器有限公司;MIKRO-22R型高速冷冻离心机 德国AndreasHettich GmbH公司;核酸浓度测定仪 德国Eppendorf公司;TPERSONRAL型PCR仪 美国Biometra公司。 　　1.2 动物及处理 　　雄性SD大鼠(动物合格证号0013070，动物使用许可证号SCXK(苏)2009-0002)，220 g左右，购自江苏大学实验动物中心。60 只SD大鼠饲养期间，自由采食饮水，自然光照。适应性饲养一周后，随机分为4 组：普通饮食组(NC组，n=15)、藤黄果提取物低剂量组(NC+L组，n=15)、藤黄果提取物中剂量组(NC+M组，n=15)和藤黄果提取物高剂量组(NC+H组，n=15)。饲料由江苏协同生物工程有限责任公司加工配制，各实验组饲料中含藤黄果提取物分别为0、25、50、75 g/kg，内含有效成分(-)-HCA 56%～58%，实验饲养8 周后，采集血液和肝脏、睾丸周围脂肪等组织，待测。 　　1.3 生长性能的检测 　　记录实验期大鼠体质量增加情况，称量肝脏、睾脂的质量。计算肝脏指数和睾脂指数。、1.4 血清及肝脏生化指标测定采用试剂盒法检测血清及肝脏组织中TG、TC、FFA和血糖水平，所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。 　　1.5 脂代谢相关基因检测 　　1.5.1 总RNA提取取SD大鼠肝脏组织样品，用Tr i z o l试剂提取总RNA，紫外分光光度计和变性琼脂糖凝胶电泳测定总RNA浓度与纯度(OD260 nm/OD280 nm=1.8～2.0)。 　　1.5.2 反转录反转录采用2 0 mu; L体系：1 2 mu; m o l / L随机引物、0.5 mmol/L dNTP、20 U/mu;L RNA酶抑制剂、10 U/mu;L反转录酶、4 mu;L 5times;RT Buffer(250 mmol/L Tris-HCl(pH 8.3)、50 mmol/L MgCl2、250 mmol/L KCl、50 mmol/L二硫苏糖醇(dithiothreitol，DTT)、2.5 mmol/L亚精胺)。反转录流程为：RNA模板，dNTP和随机引物混合，70 ℃变性5 min，立即冷却，加入其余试剂37 ℃反应60 min，95 ℃灭活5 min。所得产物放于-20 ℃保存备用。脂代谢相关基因引物序列使用Primer 5.0软件设计，由Invitrogen生物技术有限公司合成。引物序列及相关参数如表1所示。 　　1.5.3 实时定量-聚合酶链式反应(real time quantitypolymerasechain rea