详谈黄连对P-糖蛋白介导的抗癫痫药的调节作用.docVIP

详谈黄连对P-糖蛋白介导的抗癫痫药的调节作用 　　癫痫是神经系统的常见疾病，我国的癫痫患者平均每年新增40 余万例，且18 岁以下患者高达75%~80%。临床采用的抗癫痫药物(antiepileptic drugs，AED)尽管对许多患者具有明显疗效，但仍有30%~40%癫痫患者经一定时期适当治疗后仍未达到无发作或长期用药后出现药物抵抗。国内外学者发现， P- 糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)与此相关，其可介导AED泵出脑组织或阻止AED 进入脑内，所以抑制P-gp的表达及功能是开发新型癫痫药物及治疗方法的新途径。但目前治疗癫痫的P-gp 抑制剂的研发主要集中于西药领域，如环孢素、PSC-833、VX-710等，由于这些药物存在不良反应大、选择性差或亲和力低等缺点，至今未被批准用于临床癫痫的治疗。中药因具有不良反应小、多靶点、多途径的综合调节作用等先天优势，成为开发的新契机。黄连(Coptidis Rhizoma，CR)是一种常用中药，有清热燥湿，泻火解毒之功效，研究发现其对P-gp有抑制作用，另有报道黄连温胆汤在小儿神经系统疾病中有清热化痰解郁，开窍宁神的作用，但尚无文献报道黄连联合抗癫痫药治疗癫痫的疗效以及黄连对P-gp 介导的抗癫痫药透过血脑屏障(blood brain barrier，BBB)的影响。因此，本研究借助P-gp 抑制剂维拉帕米和常用抗癫痫药卡马西平，对上述内容展开研究，为临床癫痫病的治疗提供参考。 　　1 材料 　　1.1 药物 　　黄连(福建同春医药有限公司中药分公司)，经福建省中医药大学阮君山副教授鉴定为毛莨科植物黄连(Coptis chinensis Franch.)的干燥根茎;卡马西平对照品(中国药品生物制品检定所，纯度：98%，批号：0142-9503);卡马西平片(诺华制药，每片200 mg，批号：X0295);盐酸维拉帕米缓释片(江苏恒瑞制药有限公司，每片0.12 g，批号：100801);戊四唑(阿拉丁试剂公司，纯度：98%，批号：P103065);士的宁(中国药品生物制品检定所，纯度：98%，批号：100240-200702);乙腈、甲醇(国药集团化学试剂有限公司，色谱纯);0.9%NaCl 注射液(福州海王福药制药有限公司);实验用水均为重蒸水。 　　1.2 仪器 　　LC-20AD 高效液相色谱仪(日本岛津公司);TG16-WS 台式高速离心机(湘仪仪器厂);XW-80A涡旋混合器(上海医科大学仪器厂);AE-240 电子分析天平(美国梅特勒公司)。 　　1.3 动物 　　KM 小鼠，清洁级，♂，(18plusmn;2)g，购自福建省医学科学研究院吴氏实验动物中心，生产许可证号：SYXK(闽)2011-0002。 　　2 方法 　　2.1 药液制备 　　戊四唑、士的宁使用前用生理盐水分别配置成为8，0.1 mg·mL?1 的溶液，4 ℃冷藏;称取黄连2 g 于50 mL 烧杯中，加10 倍量水浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，四层纱布过滤，滤渣再用10 倍量水煎煮0.5 h，四层纱布过滤，合并2 次滤液，水浴浓缩得生药浓度为0.2 g·mL?1 的黄连水煎剂。卡马西平和维拉帕米用生理盐水分别配置成为8 ，4 mg·mL?1 的混悬液，用前配置并摇匀使用。 　　2.2 戊四唑造模及处理 　　小鼠50 只随机分为模型组、高、中、低剂量联用组(黄连高、中、低剂量联用卡马西平)和卡马西平组，每组10 只。黄连的高、中、低剂量参考黄连毒性研究中小鼠的半数致死量(LD50)[12]，分别为LD50 的1/10、1/20 和1/40。具体按表1 剂量灌胃给药，模型组给予等体积生理盐水，给药后30 min，腹腔注射戊四唑95 mg·kg?1，观察小鼠的发作情况。 　　2.3 士的宁造模及处理 　　取健康小鼠50 只，随机分为模型组、高、中、低剂量联用组(黄连高、中、低剂量联用卡马西平)和卡马西平组，每组10 只。按表2 剂量灌胃给药，模型组给予等体积生理盐水，灌胃后30 min 腹腔注射士的宁1.25 mg·kg?1，观察小鼠的发作状态。 　　2.4 痫性发作分级及观察 　　采用Racine 标准[13]，即0 级：无发作反应;1级：节律性口角、耳或面部肌肉抽动阵挛;2 级：点头并伴随更严重的面部肌肉抽动阵挛;3 级：出现前肢阵挛但不伴随直立;4 级：前肢阵挛伴随直立;5 级：全身强直阵挛发作而跌倒。连续观察30 min，记录各组小鼠给药后的行为学变化。 　　2.5 黄连对卡马西平透过BBB 的影响 　　2.5.1 分组与给药 小鼠3