详谈青蒿素脂质纳米粒的体外释放的摄取特性.docVIP

详谈青蒿素脂质纳米粒的体外释放的摄取特性 　　青蒿素(artemisinin，ART)是从植物黄花蒿中提取分离得到的具有内过氧桥结构的倍半萜内酯类化合物，为目前治疗疟疾的一线药物。该类药物因其特殊的化学结构，可减少血液中传播疟疾的疟原虫配子体，主要作用于膜系结构，干扰了疟原虫的表膜-线粒体功能，阻断了宿主红细胞浆对疟原虫的营养供给，具有良好的临床效果。青蒿素在水中几乎不溶，现有的制剂主要有油针、片剂、栓剂等。本课题组将其制成青蒿素脂质纳米粒(artemisininnanostructuredlipidcarrier，ART-NLC)，制成冻干粉稳定性好，静脉注射给药后血药浓度平稳。纳米结构脂质载体(NLC)静脉注射给药存在一些问题:可被单核巨噬细胞(mononuclearphagocytemacrophage，MPM)吞噬，体内循环时间短，限制了其靶向给药。为了克服上述问题，充分利用NLC的载药优势，对其表面修饰成为近年来研究NLC的热点。其中用聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)或其衍生物对NLC进行表面修饰的研究日益活跃，并将有良好的前景。由于PEG分子的亲水性和柔顺性，PEG修饰后NLC将较少受到调理素的调理，进而减少其被MPM识别吞噬的机会，体内循环时间延长，称为长循环纳米结构脂质载体(PEGNLC)。PEG-NLC具有长循环特性，再借助NLC控释作用，可以延长载药粒子在血液循环滞留时间，从而增强药物在血液循环系统中的被动靶向性和疗效。由于PEG-NLC的表面特性等理化性质是影响其体内命运的关键因素。本研究在本实验室先前工作的基础上，构建3种不同聚合度的聚乙二醇硬脂酸酯(PEGn-SA，n=25、40、55)表面修饰的青蒿素脂质纳米粒(PEGn-ART-NLC)，探讨PEGn-ART-NLC的体外释放及巨噬细胞(J774)摄取特性，为静脉注射PEG-NLC长循环给药系统提供理论和实验依据。 　　1材料与方法 　　1.1药品和试剂 　　青蒿素原料药(ART，重庆华立武陵山制药有限公司，纯度99.0%～101.0%，批号C00120130510);青蒿素标准品(中国食品药品检定研究所，批;中链甘油酸三酯(MCT，德国萨索尔);单硬脂酸甘油酯(GMS，天津市光复精细化工研究所，批;PEGn-硬脂酸酯(n=25、40、55)(梯希爱化成工业发展有限公司);聚氧乙烯氢化蓖麻油(RH40，上海运宏化工制剂辅料有限公司);泊洛沙姆188(F68，德国巴斯夫);纯化水(HealForce);巨噬细胞细胞株(J774，中科院上海细胞库);DMEM培养基(DulbeccosmodifiedEagle’smedium)、胎牛血清(fetalbovineserum)购自Gibco公司;乙腈、甲醇(色谱纯，山东禹王试剂有限公司，批号2013061005);其他试剂均为分析纯。 　　1.2仪器 　　高效液相色谱仪(美国Agilent1200);马尔文粒度仪(Malvern，1079008);高压乳匀机(APV-2000);高速分散均质机(上海标本模型厂，FJ-200);台式离心机(上海安亭科学仪器厂，TDL-5-A);HY-2调速多用振荡器(江苏中大仪器厂);FA1104N电子天平(上海民桥精密科学仪器有限公司);85-2数显恒温磁力搅拌器(荣华仪器制造有限公司)。 　　1.3方法 　　1.3.1ART-NLC的制备PEGn-ART-NLC和ART-NLC的处方见表1，处方筛选及工艺优化工作将另文报道。制备方法均采用高压乳匀法。 　　1.3.2ART体外含量测定采用本实验室已建立的HPLC-柱后衍生化-UV检测方法测定ART含量。青蒿素分子结构内无共轭基团，仅在紫外区203nm处有较弱的末端吸收。与碱反应后，分子内的过氧桥结构被破坏，重排形成共轭结构，产物在289nm处有最大吸收。由于反应有碱存在，损坏色谱柱，不宜直接进样，因此选用柱后衍生化法进行测定。色谱条件如下:色谱柱:C18液相色谱柱(5mu;m，150mmtimes;4.6mm);流动相:乙腈-0.1mol/L醋酸盐缓冲盐(77∶23);流速:流动相0.7mL/min，柱后衍生试剂(1mol/LKOH90%乙醇溶液)0.2mL/min;柱温:30℃;柱后反应温度:70℃;进样量:20mu;L;检测波长:289nm。 　　1.3.3体外释放实验 　　1.3.3.1释放介质的选择为研究ART-NLCs体外释放规律，经试验选用pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)作释放介质。 　　1.3.3.2ART-NLCs体外释放分别精密量取各ART-NLC