谈分子印迹-化学发光传感器测定贝母属类样品中的贝母素乙.docVIP

谈分子印迹-化学发光传感器测定贝母属类样品中的贝母素乙 　贝母素乙生物碱是贝母类属植物中的主要活性成分之一，具有祛痰、止咳、镇咳、解毒、平喘、抗菌等功效，临床主要用于干咳少痰、淋巴结核、哮喘支气管炎等疾病的治疗。目前，微量贝母素乙的分析方法主要有高效液相色谱-蒸发光散射检测器法、高速逆流色谱法、近红外光谱法和薄层色谱法等。但在进行复杂样品分析时，由于干扰物的存在，严重影响了样品中痕量贝母素乙的测定。因此，亟需建立准确、快速的贝母素乙检测分析方法。 　　化学发光分析法( CL) 已在药物、食品安全控制、环境卫生检测和元素分析等领域有着广泛地应用。虽然化学发光法对被测物质的分析灵敏度高，但选择性差，所以限制了其在复杂样品中的分析和应用。分子印迹聚合物( MIP) 具有选择性高、识别能力强、合成简单、低成本、耐酸碱和高温等特点。MIP 在固相萃取、抗体和受体模拟物、色谱分离、生物分析、食品和医药等方面得到了广泛的应用研究。MIP 虽然具有较好的选择性和很高的稳定性，但依靠溶剂的洗脱作用除去模板分子是非常困难的。目前，用分子印迹聚合物制备的化学发光传感器，不但能提高方法的选择性，而且还可以解决模板分子包埋过深而难以脱附的问题。 　　本文以贝母素乙为模板分子，分别用环氧树脂、聚乙二醇1000 和二乙烯三胺作为功能单体、致孔剂和交联剂，通过逐步聚合反应，合成出贝母素乙分子印迹聚合物。用贝母素乙分子印迹聚合物填充固相萃取柱，连接在流动注射化学发光仪流通池的通路中，作为化学发光传感器的识别元件。使用化学发光体系贝母素乙-酸性高锰酸钾-硫代硫酸钠进行贝母素乙的检测。建立了测定贝母素乙的分子印迹-化学发光传感器的分析方法。将此传感器直接用于测定川贝母、浙贝母和青海暗紫贝母样品中的贝母素乙，结果令人满意。该传感器对贝母素乙的检测具有较高的灵敏度和较好的稳定性。 　　1 实验部分 　　1. 1 主要仪器与试剂 　　IFFM-D 型流动注射化学发光仪( 西安瑞迈电子科技有限公司) ; UVmini-1240 型紫外可见分光分度计( 日本岛津公司) ; KQ-5200DB 型数控超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ;AB2042N 型电子天平( 上海梅特勒-托利多仪器有限公司) 。贝母素乙、贝母辛( 色谱纯，上海源叶科技生物有限公司) ; 川贝母、浙贝母、青海暗紫贝母( 青海西宁宝瑞康大药房) ; 环氧树脂( 化学纯，郑州澳彩化工原料有限公司) ; 二乙烯三胺( 分析纯，上海鼓臣生物技术有限公司) ; 聚乙二醇-1000( 化学纯，江苏省海安石油化工厂) ; 盐酸( 分析纯，上海青凤化工厂) ; 硫代硫酸钠( 分析纯，郑州子诺商贸有限公司) ; 甲醛( 分析纯，西安蓝翔化工有限公司) ; 实验用水为二次蒸馏水。 　　1. 2 贝母素乙分子印迹聚合物( MIP) 的制备 　　称取8. 0 g 聚乙二醇1000( PEG) 于1 000 mL烧杯中，水浴60 ℃下溶解，加入0. 430 g 贝母素乙，搅拌器搅拌混匀。然后加入2 g 二乙烯三胺，继续混匀，随后加入8 g 环氧树脂，强烈搅拌数分钟，置于超声仪排气，得聚合物溶液，将其移入封口的5. 0 mL 一次性注射器中，用薄膜塑料密封，放在60 ℃恒温烘箱内，聚合反应24 h，得到白色棒状的贝母素乙MIP。取出后冷却至柱体硬化，使用锉刀等工具将柱体变为粉末状。用60 ℃蒸馏水多次冲洗放在烧杯里的MIP 粉末，然后在60℃烘箱内干燥2 h，备用。非印迹聚合物( NIP) 除不加贝母素乙外，其他步骤相同。 　　1. 3 结合实验 　　在0 ～ 10. 0 mmol /L 浓度范围内，分别向12个25 mL 比色管内加入5. 0 mL 贝母素乙甲醇溶液，再加入20. 0 mg 去除贝母素乙的MIP 粉末，室温下置于恒温水浴中结合12 h。取适量离心分离后的溶液稀释至一定体积，在375 nm 波长下，用紫外分光光度计测定贝母素乙的浓度，根据3 次平行测定的平均值，计算贝母素乙在MIP 上的结合量。 　　1. 4 贝母素乙分子印迹聚合物 　　柱敏感元件( 传感器) 的制备取一截直型塑料管( 3 mm times; 15 mm) ，先将一端用少许玻璃棉塞住，然后向另一端内加入10. 0mg 筛选而未洗涤的MIP，再用少许玻璃棉封填端口，此柱作为贝母素乙分子印迹-化学发光传感器的识别元件。测定数据前，将酸性高锰酸钾-硫代硫酸钠溶液通过蠕动泵流过传感器，以便清除传感器上的贝母素乙。当体系溶液流过传感器时，与柱上的贝母素乙发生反应，产生CL 信号。随着贝母素乙逐渐被消耗，CL 信号开始逐渐降低。当信号降至与NIP 的信号相同且稳定时，表明贝母素乙完全被洗脱。用二次蒸