谈基于1H-NMR 指纹图谱研究逍遥散乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗抑郁谱效关系.docVIP

谈基于1H-NMR 指纹图谱研究逍遥散乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物抗抑郁谱效关系 　　中药的“谱- 效”关联是指构建中药的“谱”和适合的药效评价模型，采用数据处理技术将图谱数据和药理学数据进行关联，建立谱- 效关系。测定1H-NMR 谱图需要较少样品，扫描时间短，容易获得，因此被广泛应用。1H-NMR 图谱可以客观、全面地反映中药化学成分的特征。陈璟等在当前中药指纹图谱谱效相关性研究思路的基础上提出了基于“工艺- 指纹图谱- 效应”研究模式。目前常用的谱- 效关系分析方法主要有灰度关联分析、相关分析、回归分析和聚类分析。逍遥散出自宋代《太平惠民合剂局方》，由柴胡、当归、白芍、白术、(炙)甘草、茯苓、干姜和薄荷8 味药材组成，现代临床以及药理研究表明逍遥散有明显的抗抑郁作用。本课题组前期研究发现逍遥散低极性组分抗抑郁作用明显，采用灰度关联分析和相关分析对XYE-E 的谱效关系进行研究，表征其药效物质基础，为逍遥散的新药效开发提供依据。 　　1　材料和试剂 　　1.1　植物材料 　　逍遥散药材组成为：柴胡30 g，当归30 g，白术30 g，白芍30 g，茯苓30 g，甘草15 g，生姜10 g，薄荷10 g;以上药材均购自山西省华阳药业有限公司，经山西大学中医药现代研究中心秦雪梅教授鉴定为正品。 　　1.2　仪器和试剂 　　RE-52A 旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);Bruker 600 MHz Avance Ⅲ NMR 谱仪(德国Bruker公司);Centrifuge TDL-5 型离心机(上海安亭科学仪器厂);BSA124S 分析天平(SI 德国赛多利斯公司);温度计;计时器;有机玻璃缸等。盐酸文拉法辛胶囊(25 mg/ 粒，批号120401，成都康弘药业集团股份有限公司);氘代甲醇(99.8%，德国默克公司)。1.3　动物 　　雄性ICR 小鼠，SPF 级，动物许可证号：SCXK(京)2011-0012，18~22 g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。动物自然昼夜节律光照，适应1 周后进行实验。 　　2　方法 　　2.1　XYE-E 的制备 　　XYE-E 按照以下工艺进行制备: 处方量的逍遥散药材，加入8 倍量75% 乙醇回流提取1.5 h，滤过，滤液浓缩至一定量后，加等倍量的乙酸乙酯萃取，振摇0.5 h，静置0.5 h，共萃取3 次，合并萃取液，浓缩，蒸干得XYE-E。 　　2. 2　XYE-E 的1H-NMR 图谱测定 　　称取XYE-E 约25 mg，加700 mu;L 氘代甲醇溶解，溶解液转移至1.5 mL 离心管中，13 000 rpm 转低温离心10 min，移取600 mu;L 上清液于核磁管中，平行制备6 份，进行1H-NMR 测定。XYE-E 在25℃下于600 MHz NMR 仪上测定(频率600.13 MHz)，采用ZG30 序列，扫描次数为64，脉冲间隔为1.0 s，延迟时间为5.0 s。氘代甲醇(delta; 3.30 ppm)用于锁场和定标。 　　2.3　小鼠悬尾实验 　　雄性ICR 小鼠适应1 周后，随机分为3 组，每组12只，分别为空白组，阳性组(盐酸文拉法辛0.05 g·kg-1)，XYE-E 组(生药46 g·kg-1)。XYE-E 使用前用0.5%CMC-Na 与0.5% 吐温80 混合物稀释至相应浓度，盐酸文拉法辛使用生理盐水稀释至同等浓度，各组灌胃给药20 mL·kg-1，空白组给予等量色拉油，连续14 d。末次给药1 h 后，将小鼠尾尖1 cm 处黏贴于悬挂钩上，并且手托小鼠将其挂入动物行为视频分析系统观察箱中，记录6 min 内小鼠的绝望行为，分析后4 min 内小鼠的不动时间。 　　2.4　小鼠强迫游泳实验 　　动物分组及给药同“2.3”项下。末次给药1 h 后，用动物行为视频分析系统记录6 min 内小鼠的游泳行为状况，分析后4 min 内小鼠的不动时间。 　　2.5　数据分析 　　核磁图谱采用MestReNova 进行处理。谱- 效的数据处理采用相关分析(SPSS 16.0)和灰度关联分析。 　　3　结果与分析 　　3.1　药效学评价 　　XYE-E 对小鼠悬尾实验和强迫游泳实验中不动时间的影响如图1 所示，XYE-E 能减少小鼠悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间，与空白对照组比较均具有显著性差异(P lt; 0.01)，表明XYE-E具有明显的抗抑郁作用。 　　3.2　XYE-E 特征峰的选择与定量 　　为XYE-E 的1H-NMR 图谱，根据文献共指认出14 种化学物质，分别为柴胡皂苷类，阿魏酸，藁本内酯，白术内酯，芍药苷，甘草苷等物质。在1H-NMR 图谱中，共振