谈基于5 种生物碱定量分析的马钱子总碱提取工艺优化.docVIP

谈基于5 种生物碱定量分析的马钱子总碱提取工艺优化 　　马钱子为马钱科植物马钱(Strychnos nux -vomica L.)的干燥成熟种子，具有通络止痛、散结消肿之功效，临床用于治疗跌打损伤、风湿顽痹、痈疽肿痛等。现代药理研究表明，马钱子还具有较强的抗肿瘤活性，可用于治疗皮肤癌、乳腺癌、脑肿瘤、食管癌和胃癌等多种恶性病症。 　　马钱子由于毒性较强，临床多炮制后入药。作者对真菌发酵马钱子以及降毒保效也进行了较多的研究。无论炮制或发酵后的马钱子，其主要活性成分均为生物碱类，包括士的宁(strychnine)、马钱子碱(brucine)、士的宁氮氧化物(strychnine Noxide)、马钱子碱氮氧化物(brucine N-oxide)和番木鳖次碱(vomicine)等。 　　目前，文献报道马钱子总生物碱的提取方法较多，但大多仅以马钱子中含量较高的士的宁和马钱子碱作为优化指标。管庆霞以士的宁和马钱子碱的含量为指标，比较了冷浸提取、热浸提取、超声提取、渗漉提取和回流提取对马钱子总生物碱提取率的影响，结果显示回流提取法的效率最高。祁艳等改进了已有的氨性氯仿浸渍提取工艺，总生物碱得率明显提高。李彦超等比较了氨性氯仿、水、酸水与酸性乙醇作为溶剂，回流提取马钱子总生物碱的提取率，结果表明酸性乙醇的提取效率优于其它方法;魏秀德等在对提取工艺的考察中也证实了酸性乙醇为马钱子生物碱提取的有效溶剂。至于马钱子生物碱成分含量测定的方法，国内已报道应用薄层扫描法(TLCS)和高效液相色谱法(HPLC)。TLCS 法分离能力明显不足，且分析结果受多种因素的影响而稳定性较差。HPLC 法分离效能高，快速稳定，已成为马钱子生物碱定量鉴定的最常用方法。 　　作者首先通过对色谱方法学的考察，建立了同时测定5 种马钱子生物碱(士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物和番木鳖次碱)的RP-HPLC 法;然后再以这5 种马钱子生物碱的总量为指标，采用L9(33)正交实验法，对马钱子总碱的回流提取工艺条件(溶剂用量、质量浓度和提取次数)进行优化。 　　1.1 仪器 　　LC-10AT 高效液相色谱仪， 包括LC-10AT 双泵、CBM-10A 系统控制器、7255i 手动进样阀、SPD-10A 紫外检测器和CLASS-LC 10 化学色谱工作站，日本Shimadzu 公司制造;ERC-3415 型四通道在线脱气机， 日本Shodex 公司制造;AT-530 型柱温箱，天津Autoscience 公司制造;分析天平，美国MettlerToledo 公司制造;UV 2401 型紫外分光光度计，日本Shimadzu 公司制造;HH2 型数显恒温水浴锅， 金坛市荣华仪器制造有限公司制造;KQ-500E 数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司制造。 　　1.2 试剂 　　甲醇(批号12031910396， 分析纯)， 无水乙醇(批号12040110503，分析纯)，南京化学试剂有限公司产品;盐酸(批分析纯)，上海中试化学工业总公司产品;甲酸(批分析纯)，上海凌峰化学试剂有限公司产品; 氨水( 批号分析纯)，国药集团化学试剂有限公司产品;三乙胺(批号分析纯)，国药集团化学试剂有限公司产品;乙腈(批号101134，色谱纯)，美国TEDIA 公司产品;实验用水，娃哈哈公司产纯净水。 　　1.3 标准品 　　士的宁(以下简称S，批号990317)，日本和光(WAKO)纯药工业株式会社产品;马钱子碱(以下简称B，批号M9F5231)，日本半井(NACALAI)药业株式会社产品;士的宁氮氧化物(以下简称SNO)，自制， 由士的宁经半合成而成， 经UV、IR、1H-NMR、13C-NMR 和MS 确定结构;马钱子碱氮氧化物(以下简称BNO)，自制，由马钱子发酵品中提取、分离得到， 经UV、IR、1H-NMR、13C-NMR 和MS 确定结构;番木鳖次碱(以下简称V)，自制，从马钱子发酵品中提取、分离得到， 经UV、IR、1H-NMR、13CNMR和MS 确定结构。上述5 种对照品经HPLC面积归一化法分析，纯度均达98%以上。 　　1.4 药材 　　制马钱子(产地云南，批号709240226)，经南京中医药大学潘扬教授鉴定为马钱科植物马钱(Strychnos nux-vomica L.)的干燥成熟种子。 　　2.1 5 种马钱子生物碱RP-HPLC 测定的方法学 　　2.1.1 对照品溶液的制备 　　精密称取S、B、SNO、BNO 和V 的对照品4.88、4.65、5.55、5.94 mg 和5.00 mg，分别置于5 mL 的容量瓶中