谈大鼠口服灌胃腰痛宁粉的药物代谢动力学.docVIP

谈大鼠口服灌胃腰痛宁粉的药物代谢动力学 　　腰痛宁胶囊为纯中药制剂，是国家中药保护品种，具有消肿止痛、疏散寒邪、温经通络的功效，临床主治腰椎间盘突出、腰椎增生等症。君药马钱子有显著的镇痛和中枢神经抑制作用，主要有效成分为生物碱类，其中马钱子碱和士的宁约占总生物碱总质量的80%～90%，有明显的药效与毒性，临床易因服药过量导致血药浓度过高引发药物安全事故。由于马钱子碱和士的宁在腰痛宁胶囊中的含量极低(质量分数分别约为0.32%和0.48%)，鲜见腰痛宁服药后的药物代谢动力学研究报道。本文测定了两种有效成分马钱子碱和士的宁的血浆药物含量以及腰痛宁在大鼠体内的药物代谢动力学行为，此研究对优化临床剂量、保证用药安全具有重要的意义。 　　1　材料与方法 　　1.1　实验动物 　　SD大鼠，体重(250plusmn;20)g，雄性，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK(沪)2012-0002。 　　1.2　药品与试剂 　　马钱子碱(Brucine，B)对照品，纯度大于95.9%，中国药品生物制品检定所，批号：110706-200505;士的宁(Strychnine，S)对照品，纯度大于97%，中国药品生物制品检定所，批号：110705-200306;肝素钠，Life　Science公司;戊巴比妥钠，SIGMA公司;氯化钠注射液(华裕(无锡)制药有限公司);腰痛宁粉，课题组自制;异丙醇和乙腈，HPLC级，德国Merck公司;庚烷磺酸钠，IPC级，东京化成工业株式会社;磷酸二氢钾、磷酸、氨水、正己烷，分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司;三氯甲烷，分析纯，上海化学试剂有限公司。 　　1.3　仪器 　　LC-20AD　XR 高效液相色谱仪(日本岛津公司)，TDL-5-A台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，ML104/02电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，DS-3510DTH超声波清洗器(上海生析超声仪器有限公司)，GL-88B涡旋混合器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，HWS28电热恒温水浴锅(上海恒一科学仪器有限公司)。 　　1.4　动物给药及样本采集 　　SD大鼠禁食不禁水12h后，随机分为12组，每组6只。根据预实验结果，腰痛宁给药剂量过高(大于1　500mg/kg)时，极易出现大鼠抽搐致死;而按成人剂量的1.2倍(182mg/kg)给药，在大鼠血浆中检测不到马钱子碱与士的宁;在800mg/kg剂量下实验大鼠基本不出现中毒症状，且在设定的给药区间内，血药浓度可测。每100g大鼠质量给予1mL悬浊液，分别于给药后5，15，25，30，35，45，60，90，120，180，360，720min自腹腔主动脉取血6mL至肝素化离心管中，动物麻醉处死，5　000r/min离心10min，分离血浆，-20℃冷冻保存。 　　1.5　血样中马钱子碱和士的宁浓度检测 　　1.5.1　HPLC分析条件 　　Inertsil　ODS-SP色谱柱(250mmtimes;4.6mm，5mu;m)，C18预柱;流动相：a为乙腈，b为0.02mol/L磷酸二氢钾溶液与0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液等体积混合液(用体积分数为10%磷酸调pH=2.72)，a与b的体积比30∶70，临用前配制;二极管阵列检测器(Diode　Array　Detector，DAD)，检测波长：254nm;流速：1.0mL/min;进样量：50mu;L;柱温：30℃。 　　1.5.2　血浆样品处理 　　取出待测血浆样品，室温解冻，精密吸取3mL于25mL离心管中，加氨水300mu;L，涡旋30s，加18mL正己烷-三氯甲烷-异丙醇混合溶剂(体积比为60∶35∶5)，涡旋3min，超声10min，静置10min，重复涡旋3min，超声10min，静置10min，5　000r/min离心10min，收集上清液，下层残渣再加15mL混合溶剂重复提取，合并上清液，45℃恒温水浴氮气吹干，600mu;L甲醇复溶，过0.45mu;m有机系微孔滤膜，-20℃冷藏待测。 　　1.5.3　标准溶液的配制 　　对照品溶液的制备：精密称取对照品B　5mg，S　5mg，分别用甲醇溶解定容，配制成1mg/mL的对照品储备液;精密吸取适量储备液混合，甲醇稀释并定容至5mL，得混合对照品溶液(B、S质量浓度分别为0.03和0.06mg/mL)，用甲醇稀释得一系列不同浓度的对照品工作液。质控(Quality　Control，QC)样品的制备：以空白大鼠血浆作基质，将不同质量浓度的对照品工作液稀释成质量浓度分别为B：9，37.5，60，82.5，228，307.5，375，450ng/mL;S：18，75，120，165，315