外源性化学物的基础毒理性与研究方法.pptVIP

外源性化学物的概念 有些对人体有益如：吃饭，喝茶等 有些对人体无作用：如糖精 有些对人体有害如：农药 外源性化学物对机体作用的研究方法以及优缺点 整体动物实验 一般的研究应用 离体器官研究 如蛙心灌流 细胞培养 短期快速实验，不招动物保护组织反对 毒理学评价程序 　　本程序包括四个阶段，即急性毒性试验，蓄积毒性和致突变试验，亚慢性毒性（包括繁殖、致畸）试验和代谢试验，慢性毒性（包括致癌）试验。 基础研究的分类 急性作用 蓄积作用 亚慢性作用 慢性作用 按微生物学控制原理分类 实验动物可分为 普通级 清洁级 SPF级（Specific Pathogen Free)无特定病原体的动物 无菌动物 普通级动物——未经严格控制微生物的动物，饲养在开放环境设施中。用于教育示教。不允许存在人畜共患病和严重的动物传染病。如沙门氏菌、出血热、弓形虫、螨、虱，猴疱疹病毒（B病毒），鼠痘病毒 清洁级动物——动物体内外不携带人畜共患的病原体或动物传染病病原体的动物。对动物危害大的、科学研究干扰大的微生物不允许存在。如肝炎病毒、仙台病毒 SPF级（无特定病原体的动物）——是指实验动物体内不存在特定病原微生物和寄生虫的特殊动物。 不允许存在干扰实验的潜在感染，如绿脓杆菌。 饲养在屏障环境设施系统中。 来源：无菌动物→悉生动物→SPF动物 悉生动物——指体内携带的微生物是经人工有计划投给的已知菌或动物生存必需菌。如大肠杆菌或双歧杆菌。 无菌动物——是指动物体内外无任何微生物和寄生虫的动物。是经人工剖腹产净化培育出来的。饲养在隔离环境设施中。 动物的选择 根据物质的特点选择，在毒性试验中，原则上应尽量使用与人具有相同代谢途径的动物种系来进行较长期的试验。一般选择最多的是鼠类，但是需要注意大小鼠自己的特点，如，大鼠无胆囊。环境检测使用鱼类 实验经济，方便 实验动物年轻健康未孕 雌雄等量，分笼饲养 毒理学常用的 小鼠，大鼠，豚鼠，狗，猫，猪，猴 动物染毒方法 原则：根据毒物进入机体的方式 经口染毒1灌胃 2自由饲（代谢笼）3 吞咽胶囊 经呼吸道染毒 经皮肤染毒 特殊的染毒方式：如化妆品的眼睛刺激性，某部分器官的特殊染毒，注射染毒等 急性毒性的概念 机体一次或24h内多次接触外源性化学物后在短期内所产生的毒性效应，包括一般行为和外观改变、大体变化及死亡效应。 急性实验 目的： 　　一、LD50； 二、基本情况的观察 三、为蓄积性和亚慢性试验的剂量选择提供依据。 四、机制研究提供线索 急性毒性实验程序与评价 意义：是新合成化学物或新发现物品最重要的决策资料 主要参数：LD50,皮肤-皮下系数，经口-腹注系数，急性毒作用带 LD50的设计和意义 意义：是急性毒性实验的基本数据，是判断一个外源性化学物的基础数据 设计 原则：随机，不需要对照，均衡 动物的选择 性别的选择 年龄和体重的选择 实验动物的预检 数量的选择 给药前的禁食 受试物的处理 质保：保证受试物的化学结构、纯度、杂质、批号、配置等的一致性，保证产品前后各项指标的一致。 物质的溶解 毒物剂量和途径的选择 经验法： 相似物质推理法 自己实验推倒法；根据自己的实验找出合适的剂量 染毒方式 经口：不同的动物不同对待 经呼吸道：静式染毒和动式染毒 经皮肤染毒 观察指标 死亡 中毒的体征和发生过程 体重 病理学检查 观察时间 急性毒性实验一般以14天为限，也可以延长为20天， 注意有些物质可以引起迟发的反应，如CO等 对于速杀型毒物，24h的LD50与14天实验结果基本一致。 急性毒性的分级和评价 LD50的计算 S曲线计算法， Horn法 毒物的蓄积毒性 分类 物质蓄积 机能蓄积 研究方法 动物的选择（种属，性别，重量，数量等） 途径的选择 方法的选择（1固定剂量法，2加大剂量法，20天固定剂量法，生物半衰期法） 各种方法的解释 固定剂量法 先计算LD50 最少40只动物随机分成两组一为连续染毒组，一为一次染毒组 对于连续染毒组给予1/20—1/5LD50的剂量一直到该组动物的死亡率等同于一次染毒组 计算K值 如果出现染毒期间累计剂量达到5个LD50，也终止实验 剂量递增法 开始时0.1LD50，每日喂饲，4天后按固定倍数增加剂量，直到动物与对照组出现相同情况，一般21天结束 t1/2法 利用机体内外源性物质的浓度更准确的判断物质的蓄积性 不同染毒方式的染毒曲线 外源性物质在体内的代谢吸收和代谢 一室模型和二室模型的曲线形式 一室模型的计算 举例： 优缺点 优点： 用血液中的物质的浓度代替人为的观察，数据更可靠， 每一个数据的节点都是通过公式计算而来，数据更具有准确性， 优缺点 缺点 需要测定血液中的物质的浓度，方法采取HPLC法，设备昂贵， 模型的拟合需