不同方法的提取对茶花多糖的成分及生物活性的影响.doc

不同方法的提取对茶花多糖的成分及生物活性的影响 Xinlin Weia, Miaoai Chen a, Jianbo Xiao a, Ying Liu a, Lan Yu a, Hua Zhang b, Yuanfeng Wang a, 摘 要 本文主要研究不同提取方式，对于茶花多糖的成分及生物活性（TFPS）的影响。分析了传统的沸水浴法（TWE），微波法（MAE）和超声波法（UAE）提取茶花多糖的提取工艺。传统沸水浴法是得到最高产量的茶花多糖的最佳方式，并且其提取的茶花多糖中含有大量的中性糖和酸性糖。微波法提取的茶花多糖主要由两种糖类成分组成，多糖分子量一般在5000Da到31KDa之间。由微波法和超声波法提取的茶花多糖，其中含有的葡萄苷酶一般具有较低的抑制作用。由传统沸水浴法提取的茶花多糖（2mg/ml）中的葡萄苷酶，具有高达83.3%的抑制作用。在浓度为3.0μg/ml同等条件下，对于淋巴细胞，传统沸水浴法提取的茶花多糖比茶叶多糖（TPS）具有更强的扩散作用。 绿茶，由茶树叶子制成，在全世界消费饮品中排名第二。 （Krafczyk Glomb, 2008;Sultana et al., 2008; Tsubaki, Iida, Sakamoto, Azuma, 2008; Xiaoet al., 2008）。与茶叶相比，茶花具有与之基本相同的化学成分，但茶花含有更少的咖啡因和更多的茶多酚(Yung, Sang, Jen, 2003)。茶花含有许多营养物质，比如：蛋白质、糖、蔗糖、维生素、氨基酸、茶多酚和咖啡因(Yang, Xu, Jie, He, Tu, 2007)。这样看来，茶花其实和茶叶一样具有重要的应用价值。但很久以来，很少有关于茶花的研究。 茶花多糖（TFPS）是茶花的主要作用成分，并且含量很高。最近，茶多糖（TLS）引起学者们的广泛关注(Chen et al., 2003; Lee et al.,2006; Monobe, Ema, Kato, Maeda-Yamamoto, 2008; Zhouet al., 2007)。关于茶花多糖的分析与应用同样引起许多重视。伴随着扩大植物提取物应用条款的需求，对于生物活性成分的兴趣也不断增加。多糖的提取方式主要包括传统沸水浴法（TWE），和微波法，超声波法来提高提取效率(Hou Chen, 2008; Hou, Zhang, Xiong, Li, Yang, 2008; Liang, 2008; Wang, Zhou, Wen, 2006)。但是茶花多糖，是一种具有复杂化学成分的复合多糖，很容易在提取过程中，改变或者失去活性。本文将着重研究提取茶花多糖的传统沸水浴法、微波法和超声波法，以及其生物活性。 2.1 材料 茶花产自中国河北省。米羟基联苯购买自Fluka公司（MO.USA）葡糖苷酶购买自Sigma公司（MO.USA）。P-硝基酚α-D吡喃葡萄糖购买自上海实生细胞技术有限公司。还原性谷胱甘肽， 1640型细胞培养基、G-250考马斯亮蓝和牛血清蛋白（Shanghai, China）。所有试剂和溶剂均为分析纯，除非提及，否则没有进一步提纯，所有水溶液均为预先准备好的新鲜重蒸馏水。 苯酚硫酸酯决定决定多糖性质（Tatsuga et al., 2005）。用酒石酸亚比色法铁法测定茶多酚成分（Ozkan, Sagdic, Baydar, Karamahmutoglu, 2004）。用G-250考马斯亮蓝法测定蛋白质。(MurpMurphey,Spayd, Powers, 1989)。类黄酮浓度总量测定方法是用加入氯化铝试剂与类黄酮化合物形成黄色络合物，测定其吸光度。（(Pourmorad, Hosseinimehr, Shahabimajd, 2006）。 取干花切碎（50g），放入400ml蒸馏水后置于一定温度下水浴2h。过滤后所得茶花放入300ml蒸馏水中，置于水浴槽中，再次在相同温度下水浴1h。提取温度分别为20，40,60,80和100℃。然后，离心，去除杂质。上层清夜通过旋转蒸发法萃取后，用95%酒精沉淀。然后将沉淀物溶于水中，透析去除小分子物质。透析后溶液冷干得到多糖粉。 取干花50g与400ml蒸馏水混合后放入1000ml的锥形瓶中。将锥形瓶置入微波提取设备。在一定的功率下提取5分钟。冷却，过滤。然后将滤渣与300ml蒸馏水混合，置于相同的功率下提取5min。微波功率分别设置为127.5,300,495,637.5和750W。微波功率是据实验性尝试调整的。进一步的分离和处理过滤物与沸水浴法相同。 取干花50g，切碎后与400ml蒸馏水混合放入1000ml锥形瓶中。然后置于超声波洗净槽，在一定的超声波