第5章+植物细胞培养.pptVIP

第5章 植物细胞培养与次级代谢产物制备 主要内容 5.1 植物细胞培养及其特点 5.2 植物细胞培养技术 5.3 植物细胞培养生产次级代谢产物 5.1.1 植物细胞培养的定义 定义：是在离体条件下，将分离的植物细胞通过继代培养增殖获得大量细胞群体的一种技术。 在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行振荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量的细胞群体的一种技术。 5.1.2 特点 平均直径比微生物细胞大30-100倍 很少以单一细胞形式生长，通常以一定细胞数的非均相细胞团方式存在。 容易被剪切力损伤 生长速度慢，操作周期长 培养基成分丰富而复杂，适合微生物生长，防治污染困难 一般需要光照，氧气和CO2的含量与传递效果对细胞培养影响较大。 5.1.3 植物细胞培养的应用 （1）药物代谢产物 （2）天然食品、食品添加剂 （3）杀虫剂、杀菌剂 （4）饲料、精细化工等产品 （1）药物代谢产物 很多种药用植物可以通过细胞培养技术生产，如人参皂苷、蒽醌、小檗碱、迷迭香酸、辅酶Q-10等。植物细胞培养除了可以生产原植物本身含有的天然药物外，还可进行生物转化和生产原植物没有的药物。 采用植物细胞培养生产的药物成分 苷类：包括皂苷（人参皂苷、三七皂苷、柴胡皂苷、薯芋皂苷原等）、强心苷（强心醇苷、毛地黄毒配质衍生物等）、干草甜苷、香豆精苷等。 甾醇：包括菜油甾醇、豆甾醇、谷甾醇、胆甾醇、异岩藻甾醇等。 生物碱：主要有吡啶、喹啉、异喹啉等。 醌类：包括蒽醌、萘醌、返醌等。 蛋白质类：利用植物细胞培养生产的这类物质主要有胰岛素、氨基酸、蛋白酶抑制剂、植物病毒抑制剂、植物抗生素等。 紫杉醇 一种用于卵巢癌、乳腺癌、肺癌的高效、低毒、广谱的抗癌药物。利用植物细胞培养生产紫杉醇被公认是一种有效的途径。 日本曾从短叶红豆杉和东北豆杉中获得愈伤组织，筛选到的细胞培养4周后增殖了5倍，紫杉醇含量达到0.05%，是天然植物中含量的10倍。 紫草宁 可用于创伤、烧伤以及痔疮的治疗。 日本三井石油化学公司采用发酵罐培养植物细胞生产紫草宁，可以满足日本市场的43%的需求。 我国南京大学从1986午开始这方面的研究，结果培养的紫草细胞中紫草宁含量占干重的14%，比天然紫草根中的含量高几倍。 人参 是用于治疗与保健的名贵药材，其主要成分是人参皂苷。人参天然资源极少，人工栽培周期长，因此价格昂贵。 日本1986年开始在生物反应器中悬浮培养人参细胞，从中提取人参皂苷，并证明药理与生药人参相同。 植物细胞悬浮培养生产天然药物成分的方法 --小檗碱 实验材料：小檗的愈伤组织细胞，采用添加激素的普通液体培养基。 培养过程：将小檗的愈伤组织细胞悬浮培养在添加一定浓度激素的普通液体培养基中培养，转速为250r／min，25℃。培养一段时间细胞浓度增加后，进行继代培养、收获。 （2）天然食品、食品添加剂 色素（胡萝卜素、叶黄素、单宁等）。 培养咖啡细胞，收集可可碱和咖啡碱； 海藻（如石花菜、江篱等）的愈伤组织培养物，生产琼脂； 培养甜菜、菠菜等的愈伤组织细胞可以收获甜菜苷类红色素； 培养甜菊叶的细胞可提取一种叫甜菊苷的天然甜味剂； 培养长春花细胞可以得到磷酸二酯酶，可以促使合成5’-核苷酸，是一种味道极好的调味品； 培养辣椒细胞可以获得辣椒素。 培养玫瑰细胞可以获得许多酚类物质； 培养洋葱细胞可以得到香料的前体物质。 十蕊商陆培养生产红色素 培养材料：十蕊商陆悬浮细胞、含3%蔗糖MS培养基。 培养过程： 将十蕊商陆的悬浮细胞振荡培养，28?℃、光照强度1500lx。 逐渐收集细胞悬浮培养物。 通过纤维柱色谱分析测定红色素含量。 1g干细胞可以收获32mg红色素粗品，物理化学性质与甜菜苷类红色素一致。 （3）杀虫剂、杀菌剂 万寿菊的培养组织或细胞，可以收获农药噻吩烷； 鹰嘴豆和扫帚艾的愈伤组织或细胞，可以得到三种鱼藤生物碱、灰叶素、鱼藤酮以及除虫菊脂等； 葫芦巴静态培养物，能分离得到蓝鱼藤酮、粉红鱼藤酮等杀虫剂； 锦葵叶愈伤组织细胞，可以收集生物碱 ……. （4）饲料、精细化工等产品 蚕 培养桑树等植物的细胞，收获、混合后再配合一些附加物如大豆粉、蔗糖、淀粉等制成饲料，就很好地解决蚕饲养的饲料供给问题。 5.2 植物细胞培养技术5.2.1 植物细胞培养的培养基 ◆无机盐 ◆碳源 ◆植物生长激素 ◆有机氮源 ◆有机酸 ◆复合物质 培养基配制成使用浓度的10倍或100倍的母液存于冰箱冷藏。 5.2.2 植物单细胞分离与小规模培养