组化免疫组化概论.docVIP

组织化学与免疫组织化学 课程介绍 组织化学概述 在形态学基础上应用化学、物理和免疫学方法研究细胞、组织中物质的化学组成、分布和含量的一门学科 组织化学概念 用已知化学反应为主的染色方法，在细胞、组织的原位上显示各种物质的特殊性 探讨生理、病理和药物作用引起组织结构、化学成分和功能改建之规律，进一步使功能、形态和代谢紧密结合 组织化学的发展与展望 1830-1870 生理组织化学（physiologist histochemistry ) 1890-1920 显微组织化学（microscopic histochemistry ) 组织化学的发展与展望 近年 酶的组织化学（enzyme histochemistry ) 电镜组织化学（electron-microscopic histochemistry ) 定量组织化学 显微分光光度计 流式细胞仪 真彩色图像分析仪 免疫组织化学（immunohistochemistry) 杂交组织化学（hybridohistochemistry) 原位分子杂交（in situ hybridization,ISH) 原位PCR（polymerase chain reaction) 技术 (聚合酶原位扩增技术) 组织化学研究的内容 蛋白质　　　　　生物胺 核酸　　　　　　特异性抗原 糖类　　　　　　无机盐 脂类　　　　　　微量元素 酶类 组织化学技术的基本要求 保持组织细胞良好形态结构 高度特异性 高度灵敏性 反应产物定位精确、具稳定性 与周围对比鲜明，易于识别 方法简便、化时少、重复性好 组织化学技术的注意事项 严格控制反应物浓度、试剂ＰＨ值、反应温度和反应时间 试剂选择－分析纯（A.R） 反应产物－有色沉着物、不溶性 试验器皿、蒸馏水 组织化学显示方法的种类 化学显色法 金属沉淀法磷酸酶 　CoS（碱性磷酸酶）或PbS（酸性磷酸酶） 磷酸底物—(反应产物——(沉淀物（显示酶性） 偶氮偶联法 磷酸酶　　　　　 偶氮偶联 萘酚族化合物—分解产物＋重氮盐——(不溶性偶氮色素 组织化学显示方法的种类 化学显色法 Schiff氏反应 显示多糖（PAS反应） 显示DNA（Feulgen反应）细胞中的醛基 Schiff试剂中无色品红————————(绛红色 联苯胺反应　 过氧化物酶检测 无色联苯胺——————(联苯胺蓝—(棕色联苯胺 　　　　　过氧化物酶 组织化学显示方法的种类 化学显色法 普鲁士蓝反应 显示含铁血黄素 Fe++++ 酸性亚铁氰化钾————( 普鲁士蓝反应 甲月替 反应 脱氢酶将底物脱氢，将四唑盐（无色）还原为双甲月替 （蓝色） 组织化学显示方法的种类 类化学反应 Best卡红（洋红）———显示糖原 物理方法 脂溶染色法 荧光分析法 放射自显影术 免疫学方法 对组织化学方法的评价 优点 能测组织中微量物质 取材小、反应较灵敏 缺点 测定步骤较多、试剂昂贵 影响因素多 组织化学方法的应用 寻找病原微生物 帮助诊断和鉴别诊断 研究探讨发病机制 研究药物作用后的代谢改变等 为临床治疗提供治疗方案选择 细胞和组织标本制备 制片程序示意 标本取材 组织固定 固定后处理 　　石蜡切片法　　　　　　　　　　　　冰冻切片法 　　　脱水　　　　　　　　　　　　　　制成冻块 　　　透明　　　　　　　　　　　　　　冷冻切片 　　浸蜡　　　　　　　　　　　　　　　贴片 　　　　包埋　　　　　　　　　　　　　　醇固定水洗 　　切片　　　　　　　　　　　　　　　染色 　　　　粘片　　　　　　　　　　　　　　贴片　脱水 　　　　脱蜡　　　　　　　　　　　　　　封片　透明 　　各级酒精　　　　　　　　　　　　　　　　　封片 水洗 常规染色　组化染色 　脱水 　透明 　封片 标本取材 细胞标本 方法 印片法 穿刺涂片法 体液沉淀涂片法 活细胞培养标本 注意事项 涂片用载玻片应先涂粘附剂 涂片时细胞应分布均匀、或用细胞离心涂片器（cytospin) 标本取材 组织标本 方法　　用切取、钳取、穿刺等方法 活体标本 取自宫颈、鼻咽、喉、皮块活检组织 内窥镜钳取组织 肝、肾等穿刺组织 手术切取标本 病灶区组织 病灶与正常交界区组织 远距离正常组织 标本取材 组织标本 动物模型标本 麻醉后取材 用乙醚或氯仿棉球 ４％戊巴比妥静脉注射 ２０％氨基甲酸乙酯腹腔注射 处死后取材 空气栓塞法 断头法 颈椎脱臼法 眼球放血法 标本取材