第七章基因的表达与调控（上）.pptVIP

IPTG(异丙基硫代半乳糖苷) 极强的诱导剂 乳糖操纵子(lac operon)的调控方式 协调调节(coordinate regulation) 负性调节(1000 倍)与正性调节(50倍)协调合作 阻遏蛋白封闭转录时，CRP不发挥作用 如没有CRP加强转录，即使阻遏蛋白从P上解聚仍无转录活性 ☆葡萄糖/乳糖共同存在时，细菌优先利用葡萄糖 葡萄糖可降低cAMP浓度，阻碍其与CRP结合从而抑制转录 结论：lac操纵子强的诱导作用既需要乳糖又需缺乏葡萄糖 三）半乳糖操纵子(galactose operon) 包括3个结构基因：?? 异构酶(UDP-galactose-4epimerase,galE)，?? 半乳糖-磷酸尿嘧啶核苷转移酶(galactose transferase, galT)，?? 半乳糖激酶(galactose kinase, galK)。 这3个酶的作用是使半乳糖变成葡萄糖-1-磷酸。GalR（调节基因）与galE、T、K及操纵区O等离得很远，而galR产物对galO的作用与lacI-lacO的作用相同。 A gal操纵子的特点：① 它有两个启动子，其mRNA可从两个不同的起始点开始转录；② 它有两个O区，一个在P区上游-67--53，另一个在结构基因galE内部。 两个相距仅5bp的启动子，可以分别起始mRNA的合成。每个启动子拥有各自的RNA聚合酶结合位点S1和S2。 从S1起始的转录只有在培养基中无葡萄糖时，才能顺利进行，RNA聚合酶与S1的结合需要半乳糖、CRP和较高浓度的cAMP。从S2起始的转录则完全依赖于葡萄糖，高水平的cAMP-CRP能抑制由这个启动子起始的转录。当有cAMP-CRP时，转录从S1开始，当无cAMP-CRP时，转录从S2开始。 B 双启动子的功能 半乳糖不仅可以碳源供细胞生长，而且尿苷二磷酸半乳糖（UDPgal）是大肠杆菌细胞壁合成的前体。在没有外源半乳糖的情况下，UDP-gal是通过半乳糖差向异构酶（galE ）的作用由UDP-葡萄糖合成的。生长过程中的所有时间里细胞必须能够合成差向异构酶。但对异构酶需求很少，本底水平的表达就能满足生理需要。 葡萄糖存在时 cAMP缺少 S1不能启动 S2启动转录 阿拉伯糖(arabino se) 是可作为碳源的五碳糖。 ? 参与阿拉伯糖代谢酶的基因分布于不同操纵子中，但由一个调节基因（araC）的产物调控。 1、基因组成 结构基因：araA、araB和araD 分别编码L－阿拉伯糖异构酶、核酮糖激酶和L－核酮糖－5－磷酸－4－差向异构酶。 调节基因：araC 操纵基因：O1、O2 基因E、F：负责转运阿拉伯糖进入细胞 araC基因位于另一个操纵子中，它编码的araC蛋白是操纵子的调控因子。 2、调节机制 AraC的结构： AraC由292aa残基组成，其N端结构域(1--170aa) 可结合阿拉伯糖并参与形成二聚体，C端（178--292aa) 为DNA结合结构域。AraC对araBAD的调控包括正、负调控两种方式。 araBAD上有三个AraC结合位点：araO1（-106—-144）、araO2(-265—-294和位于araBAD启动子的araI位点。araI位点为两个“半位点”(-56—-78和-35—-51)。araO1 在araBAD表达调控中的作用较小。 调节蛋白AraC的作用 第一，它调节它自己的生物合成。 当AraC水平较低时，其基因从Pc开始表达。当AraC蛋白浓度高时，由于AraC与AraO1结合，而araO1与AraC基因的启动子重叠，可阻遏araC基因的表达。 第二，它对araBAD既是负的调节子也是正的调节子(regulator)，它既能结合于araO2又能结合于araI。通过两种异构体实现：Pr（阻遏作用）；Pi（诱导作用）。 负调控 当cAMP水平较低且缺乏阿拉伯糖时，AraC二聚体结合在araO2和araI位点使DNA成环，阻遏araBAD的表达。 正调控 当Ara存在而无葡萄糖时，Ara与AraC蛋白结合使其构象改变而释放araO2，此时AraC结合在araO1和araI处。同时由于cAMP的积累激活CRP，活化的CRP结合在位于araO1和araI间的CRP位点。