PCR技术与方法课件.pptVIP

PCR技术与方法 聚合酶链式反应 (polymerase chain reaction, PCR): 1983年美国Mullis等发明了PCR技术，可在几小时内将DNA片段扩增109倍，具有特异性、高效率、忠实性. PCR基本原理和影响因素 一、PCR基本原理 PCR是一种快速和简便的DNA体外扩增技术。在模板DNA，引物和4种脱氧核糖核苷三磷酸存在的条件下，利用耐热DNA聚合酶进行聚合反应，经变性、退火及延伸三步骤多次循环，对特定DNA模板进行扩增。PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。 PCR扩增靶DNA示意图 双链靶DNA 例1：PCR反应步骤 PCR反应体系的组成及作用 组成PCR反应体系的元素主要包括 模板核酸、 引物、 TaqDNA聚合酶、 缓冲液、Mg2+、 三磷酸脱氧核苷酸（dNTP)等 （一）模板（template) DNA或 RNA cDNA 含40%G-C, Tm ~87o C 含60%G-C, Tm ~95o C PCR 90~96o C 可来源于各种标本