基因工程游金娥课件.pptVIP

基因工程步骤游金娥 2009161117 基因工程技术路线 1、DNA片段的取得（目的基因的分离和制备） 2、DNA片段和载体的连接——重组体DNA 3、外源DNA片段引入受体细胞——基因克隆和基因文库 4、选择基因（目的基因） 5、目的基因表达 （一）DNA片段的获得 1、从基因所在的生物体直接取得（限制性内切酶（restriction enzymes）） 2、人工合成DNA片段（DNA合成仪） 3、PCR反应合成DNA 4、 mRNA反转录成cDNA 5、用机械的方法（超声波等） （二）DNA片段和载体的连接——重组体DNA 载体：细菌中的质粒、病毒（温和噬菌体） 重组体DNA：载体DNA+引入的DNA 粘性末端 平整末端 连接酶 （三）重组体DNA引入受体细胞 受体细胞:1、原核生物细胞：较为理想，普遍作为受体细胞用来构建基因组文库和cDNA文库。如大肠杆菌、枯草杆菌、蓝细菌等。 2、真菌细胞：用于表达高等动植物基因。常用的受体细胞有酵母菌细胞。 3、植物细胞：进行转基因工作。 4、动物细胞：生殖细胞、受精卵细胞、胚细胞（转基因动物）——体细胞（克隆动物） （四）选择基因 方法： 1、遗传表型直接筛选法 2、依赖于重组子结构特征分析的筛选法