绵羊毛用性状EST源新标记的开发.doc

项目编号＿＿＿＿＿ 石 河 子 大 学 国家大学生创新创业训练计划项目 申 请 项目名称项目项目负责人学院联系电话电子邮件填表日? 石河子大学教务处制表负责人参加成员Zhaozongsh@shzu.edu.cn 项目申请理由新疆是我国重要的绵羊生产基地,细毛羊业在新疆的畜牧业经济和民族经济中占居重要的地位优质，高产羊毛是绵羊养殖的主要经济目标。皮肤是羊毛生长的基地, 毛囊是控制毛发周期性生长的皮肤附属器官，皮肤的毛囊差异基因表达是绵羊产毛量与羊毛品质的cDNA 文库中随机挑选克隆进行5’或3’端测序后得到的长约300～500 bp 的基因表达序列片段，它代表生物体某种组织某一时期的部分表达基因，因此，绵羊皮肤源EST可能蕴含着重要的调控绵羊毛囊发育的基因。随着基因组学的发展，DNA测序技术不断变革，测序成本大大降低，国际公共数据库EST数量的急剧增加，绵羊EST数据库主要包括皮肤、卵巢、肌肉等，截止到2011年10月，在NCBI上的dbEST数据库中已收录与绵羊皮肤相关的EST有11030 条，其中有效的EST为8303条，这为结合微卫星技术研究开发新型遗传标记奠定了基础。 表达序列标签微卫星(EST-SSR) 是一种基于EST中简单重复序列设计的新型分子标记技术。研究表明，7%--10%的EST序列中存在简单重复序列，其中3%可以设计出引物，这为从EST序列中开发和利用新的SSR标记奠定了分子基础。由于EST是功能基因的一部分，可以为功能基因提供绝对的标记，充分反应映出基因组功能区域的相似程度，其多态性能够更好的解释表性差异。所以，如果发现一个EST标记与某一性状连锁，那么该EST 就可能与控制此性状的基因相关。目前，EST-SSR被广泛应用于植物基因组学的研究，如遗传图谱的构建，遗传多样性评估、品种鉴别、比较作图和新基因的发现，定位等。Eujayl最早将EST-SSR 标记应用于硬质小麦品种遗传多样性分析,发现EST-SSR 标记扩增产物质量较高,但多态性低于gSSRs。闫娟等用EST-SSR标记分析了中国北部和中部地区天蓝苜蓿的遗传多样性和遗传结构，系统了解天蓝苜蓿的居群遗传变异、基因流、繁育方式及其遗传背景。王静毅等从NCBI 搜索的香蕉EST中,筛选出的重复性好、多态性高的19 对引物，将49 个品种聚为2 个类群。胥猛等对鹅掌楸EST 序列进行检索，获得 66 对多态性引物，这批EST-SSR 引物在物种之间具有较高的通用性。在动物方面，LI Bin等，分析了简单重复序列在蜜蜂EST中的分布频率与密度。ZHAN Aibin等用GenBank中收录的1476条鲍鱼EST设计开发了13对EST-SSR引物，其中10对引物有PCR扩增产物，并且表现出多态性，在这些位点上为发现连锁不平衡现象，其中的6个位点遵循哈代温伯格定律，暗示EST-SSRS是研究种内变异和杂交鉴定的潜在工具。 本研究的目的在与利用分子生物学的方法从基因的水平研究个体表达的差异性，试图利用EST标记寻找控制绵羊毛用性状的QTL，分析绵羊毛用性状与标记之间的关联程度，找出与绵羊毛用性状表达有关的主效基因。本研究预期获得的EST-SSR标记可极大地丰富绵羊分子标记，有助于标记辅助选择（MAS）在绵羊育种中的开展与应用；为了充分利用资源，更有效发掘EST可能蕴含的突变信息，项目将采用PCR-SSCP技术对单态引物进行SNP扫描，寻找可能存在的EST-SSCP位点；筛选获得的毛性状连锁的标记可用于指导绵羊育种工作，而且由于EST源于编码基因，其可能是调控毛囊发育的关键基因，对深入探讨毛囊发育的机制有重要意义。 参考文献 1.王静毅，陈业渊，刘伟良等，香蕉EST-SSRs标记的开发与应用.遗传,2008,30(7):33-34 胥猛，李火根.鹅掌楸EST-SSR引物开发及通用性分析【J】.分子植物育种，2008,6（3）:615--618 赵宗胜，王根林，马玉萍。绵羊微卫星标记与部分毛用性状的关系研究【J】.畜牧兽医学报，2006（9）:28--33. LI Bin ,XIA Qing-You,LU Cheng, ZHOU Ze-Yang.Analysis of Microsatellites Derived from Bee ESTs 【J】.Acta Genetica Sinica ,October 2004,31(10):1089-1094 ZHAN Aibin ,BAO Zhenmin .Development and Characterization of Microsatellites Markers f